2011 год № 1

Резюме:

Ключевые слова:

Summary:

Key words:

Введение

Первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ) попрежнему остается одной из основных причин необратимой слепоты и инвалидности по зрению. С возрастом число больных увеличивается от 0,1-1,5% в 40-45 лет до 10-14% в 75 лет и выше [1, 2]. В ранней фазе глаукома протекает почти бессимптомно, и выявление данного заболевания в большинстве случаев происходит на стадиях, сопровождающихся уже необратимыми изменениями зрительного нерва [4, 5, 6]. Сложившаяся ситуация ставит вопрос о необходимости поиска и разработки новых эффективных молекулярно-генетических методов ранней диагностики глаукомы и внедрения их в повсеместную практику.

В настоящий момент есть все основания относить первичную открытоугольную глаукому (ПОУГ) к группе мультифакторных заболеваний, развивающихся на фоне апоптоза, связанного с активацией проапоптических генов и белковой перестройкой содержимого клеток [3].

Ряд авторов, рассматривая вопрос о регуляции апоптоза, выделяют три его блока: ядерный, митохондриальный и экзогенный (межклеточный) [9]. Межклеточный механизм включает уменьшение в непосредственном микроокружении клетки факторов гормональной и цитокиновой природы, необходимых для ее выживания, и, напротив, повышение концентрации лигандов так называемых "рецепторов гибели": Fas-рецептора и рецептора фактора некроза опухолей TNFα [7]. Продукция TNFα регулируется несколькими частями генома, из которых наиболее очевидная сам ген TNFα .

Существует полиморфизм в области промоутера гена, который влияет на количество образуемого TNFα при активации гена. Более распространенная аллель гена TNFα - TNF1. Мутация гена приводит к замене основания в положении 308 (аденин на гуанин - A/G) и образованию гена TNF2 с более высокой способностью к образованию TNFα [8].

Учитывая увеличение синтеза фактора некроза опухоли при активации гена TNF2 и, следовательно, усиление апоптоза ганглиозных клеток сетчатки, как по межклеточному, так и по ядерному пути (посредством увеличения экспрессии р53), можно предположить влияние проапоптотического полиморфизма TNFα на риск возникновения и тяжесть течения глаукоматозного процесса [8, 9]. Основной целью нашего исследования явилось изучение роли проапоптотических полиморфизмов гена TNFα (G308A) в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы и оценка их прогностического значения для развития заболевания у резидентов Забайкальского края в этническом аспекте.

Материалы и методы

В работе с обследуемыми пациентами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki 1964, 2000 ред.). Методом сплошной выборки в процесс исследования были включены 178 (90 женщин, 88 мужчин) больных первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ) русской национальности, а также 78 (39 женщин и 39 мужчин) больных бурятской национальности, проживающих на территории Забайкальского края.

В качестве контрольной группы обследовано 190 русских (99 женщин, 91 мужчина) и 80 резидентов бурятской национальности (42 женщины, 38 мужчин), не имеющих острых и хронических заболеваний глаз и соматической патологии, приводящей к вторичному поражению органа зрения. Больные первичной открытоугольной глаукомой и здоровые резиденты прошли полное офтальмологическое обследование для подтверждения либо исключения первичной открытоугольной глаукомы.

Все больные ПОУГ имели характерные изменения диска зрительного нерва, открытый иридокорнеальный угол и типичные дефекты полей зрения. Для молекулярно-генетического исследования и получения образцов ДНК использовался буквальный эпителий. Выделение ДНК проводилось с помощью набора "Минипреп", версия с магнитными частицами и "Силекс", использовались реактивы "Евроген", "Литех" (Москва). Применялись полиморфные маркеры, основанные на тестировании однонуклеотидных замен (SNPs).

Анализ продуктов амплификации осуществлен методом электрофореза. Для проведения электрофореза использовался 2% агарозный гель с добавлением бромистого этидия. Полученные данные обработаны статистическим методом с помощью пакетов программ Biostat, Statistica 6,0 (StatSoft Inc., США), с определением достоверности различий при достигнутом уровне значимости р<0,05. Для сравнения частот и групп по качественному бинарному признаку применялся критерий (χ² (Пирсона). Для измерения силы и направления связи между изучаемыми явлениями использовался коэффициент ранговой корреляции Спирмена.

Результаты и обсуждение

В результате проведенного анализа частоты генных мутаций TNFα (G308A) среди больных первичной открытоугольной глаукомой и относительно здоровых резидентов, проживающих на территории Забайкальского края, в группе русских пациентов, страдающих ПОУГ, выявлено: 5 патологических гомозигот (2,8%), 63 гетерозиготы (35,4%), 110 нормальных гомозигот (61,8%). Частота аномальной аллели среди больных ПОУГ составила q=0,18, что значительно выше, чем среди здоровых резидентов, q=0,04 ((χ², р<0,01), в то же время нормальная аллель менее распространена в группе больных глаукомой, р=0,82, по сравнению с контрольной группой, р=0,96 ((χ², р<0,05). Из 68 больных ПОУГ с аномальными генами мужчины составили 35 чел. (51,5%), а женщины - 33 (48,5%). Интересно отметить, что из пяти аномальных гомозигот мужчин было четверо (80%), женщин - одна (20%), тогда как у здоровых мужчин гомозиготное состояние патологической аллели встречается в 66,7% случаев ((χ², р<0,05).

Из 85 пациентов, имеющих поражение обоих глаз, 52 чел. (61,2%) являются носителями аномального варианта TNFα , из них один обследуемый (1,2%) - в гомозиготном состоянии. Частота встречаемости аномальной аллели в группе больных с двусторонним поражением глаз составляет 0,38 (q=0,38), что выше, чем в общей группе больных ПОУГ (q=0,18) ((χ², р<0,05).

Таким образом, среди пациентов моложе 80 лет преобладают лица - носители генетических аномалий TNFα , страдающих ПОУГ, в сравнении с условно здоровыми резидентами этого же возраста (χ², р<0,05) (табл. 1).

В группе русских больных ПОУГ корреляционная связь между наличием аномальной аллели TNFα и наличием заболевания сильно выражена (r=0,80; 0,71), чем среди лиц с нормальными аллельными вариантами. Абсолютный риск возникновения заболевания в группе носителей аномальных аллелей - 0,38, среди носителей нормальных аллелей - 0,12. Отношение шансов (ОШ) равно 4,72 (табл. 2).

В группе пациентов бурятской национальности, страдающих ПОУГ, распределение генотипов имеет следующий вид: 43 нормальные гомозиготы (55,2%), 27 гетерозигот (35,4%), 8 патологических гомозигот (9,4%). Частота аномальной аллели TNFα (G308A) среди больных ПОУГ: q=0,26, что значительно выше, чем среди здоровых резидентов, q=0,08, в то же время нормальная аллель менее распространена в группе больных глаукомой, р=0,74, по сравнению с контрольной группой, р=0,92 (χ2, р<0,05) (табл. 1).

Из 35 больных ПОУГ с аномальными генами мужчины составили 22 чел. (62,8%), а женщины - 13 (37,2%). Интересно отметить, что из 8 патологических гомозигот мужчины составили 5 обследуемых (62,5%), женщины - 3 (37,5%), что отличается от группы здоровых резидентов, среди которых гомозиготное состояние аномальной аллели не выявлено ни в одном случае. Следует отметить, что из 41 пациента, имеющего поражение обоих глаз, 22 чел. (53,7%) являются носителями патологического варианта TNFα (G308A), из них четверо обследуемых (9,8%) - в гомозиготном состоянии. Частота встречаемости аномальной аллели в группе больных с двусторонним поражением глаз составляет 0,31 (q=0,31), что несколько выше, чем в общей группе больных ПОУГ (q=0,26) (χ², р<0,05).

В группе больных ПОУГ корреляционная связь между наличием аномальной аллели TNFα (G308A) и наличием заболевания сильно выражена (r=0,85; 0,71), чем среди лиц с нормальными аллельными вариантами. Абсолютный риск возникновения заболевания в группе носителей аномальных аллелей - 0,30, среди носителей нормальных аллелей - 0,11. Отношение шансов равно 4,19 (табл. 2).

Частоты аномальных аллельных вариантов TNFα (G308A) выше среди лиц бурятской национальности, чем среди русского населения Забайкальского края. В группе пациентов, страдающих первичной открытоугольной глаукомой, частота аномальных полиморфизмов также выше среди бурятских резидентов, что, вероятно, связано с большей распространенностью этого аллельного варианта в этнической группе в целом (χ², р<0,05).

Выводы

1. Распределение частот проапоптотических аллельных вариантов TNFα (G308A) у резидентов Забайкальского края имеет этнические особенности. Частота встречаемости TNFα (G308A) относительно выше среди лиц бурятской национальности, как в группе больных ПОУГ, так и здоровых лиц.
2. Больные первичной открытоугольной глаукомой в обеих этнических группах являются носителями проапоптотических полиморфизмов TNFα чаще, чем здоровые резиденты. Частота встречаемости неблагоприятных аллельных вариантов выше в группе больных ПОУГ бурятской национальности, что связано с высокой распространенностью проапоптотических аллелей среди бурятского населения в целом. Экспрессивность и пенетрантность проапоптотических полиморфизмов TNFα выше среди русского населения.
3. Риск развития первичной открытоугольной глаукомы выше у лиц - носителей проапоптотических аллельных вариантов генов TNFα в обеих этнических группах. Относительный риск развития первичной открытоугольной глаукомы выше у носителей проапоптотических аллельных вариантов TNFα среди русских резидентов, в сравнении с лицами бурятской национальности.
4. Полиморфизм TNFα повышает риск развития первичной открытоугольной глаукомы как в русской, так и в бурятской этнической группе, влияет на тяжесть течения и скорость прогрессирования глаукоматозного процесса.

Литература

1. 1. Алексеев В.Н., Мартынова Е.Б. Новые подходы к гипотензивной терапии первичной открытоугольной глаукомы // Клиническая офтальмология. - 2000. - С. 3-8.
2. 2. Алексеев В.Н., Егоров Е.А., Мартынова Е.Б. О распределении уровней внутриглазного давления в нормальной популяции // Клиническая офтальмология. - 2001. - Т.1, №2. - С. 38-40.
3. 3. Кириленко Ю.А., Березников А.И. Влияние состояния белоксинтезирующего аппарата организма на течение первичной открытоугольной глаукомы. - Курск, 2003. - 123 с.
4. 4. Нестеров А.П. Глаукома. - М., 1995.
5. 5. Нестеров А.П. Первичная открытоугольная глаукома, патогенез и принципы лечения // Клиническая офтальмология. - 2000. - Т. 1. - С. 4-5.
6. 6. Нестеров А.П., Алексеев В.Н. Современные аспекты патогенеза глаукомной нейроретинопатии: мат-лы VI съезда офтальмологов России. - 2000. - Т. 1. - С. 178.
7. 7. Denk P., Knorr M. In vitro effect of ascorbic acid on the proliferation of bovine scleral and Tennon's capsule fi broblasts // Eur. J. Ophthalmol. - 1998. - Vol. 8. - P. 37-41.
8. 8. Grimble R. Dietary lipids and the infl anunatory response // Proc. Nutr. Soc. - 1998. - Vol. 57. - P. 535-542.
9. 9. Eischen C.M., Kottke T.J., Martins L.M. et al. Comparison of apoptosis in wild-type and fas-resistant cells: chemotherapy - induced apoptosis is not dependent on fas/fasligand interactions // Blood. - 1997. - Vol. 90. - P. 935-943.