2011 год № 1

Фармакология и фармация

УДК 678.048 : 616 - 001.18/.19

Н.C. Шаповаленко, В.А. Доровских, Н.В. Коршунова, М.А. Штарберг, С.С. Сластин

Влияние реамберина и элеутерококка на холодовую адаптацию организма животных

Амурская государственная медицинская академия, 675000, ул. Горького, 95, тел.: 8(4162)-52-68-28, г. Благовещенск

Резюме:

Авторы анализировали 9 групп экспериментальных животных, сходных по половым и весовым характеристикам, но различных по применению фармацевтических препаратов (реамберин, элеутерококк). Подобранная дозировка данных препаратов была применена в холодовой модели эксперимента. Для исследования влияния препаратов на теплокровный организм нами исследовалась антиоксидантная система организма (показатели перекисного окисления липидов). Полученные результаты обсуждались с учетом показателей двух групп животных (интактные, контрольные), а также на основании некоторых данных литературы, из которых сделаны соответствующие выводы о действии фармакологических препаратов в условиях холода на теплокровный организм.

Ключевые слова:

холодовой стресс, адаптация, антиоксиданты

N.S. Shapovalenko, V.A. Dorovskikh, N.V. Korshunova, M.A. Shtarbcrg, S.S. Slastin

The influence of reamberin and eleutherococcus on cold adaptation of organism

Amur state medical academy, Blagoveshchensk

Summary:

The authors analyzed 9 groups of experimental animals similar in sex and weight characteristics but different by use of pharmaceutical preparations (reamberin, eleutherococcus). The selected dose of these preparations was used in the cold model of the experiment. We investigated the antioxidant system of an organism (the indices of lipid peroxidation) for the research of preparations' effects on a warm-blooded organism. The received results were discussed taking into consideration the indices of two groups of animals (intact and control) as well as based on some data of references. The conclusions about the action of pharmaceutical preparations in conditions of cold on a warmblooded organism are made.

Key words:

cold stress, adaptation, antioxidants

Введение

В настоящее время одной из важнейших проблем в современной медицине и фармакологии является решение вопросов коррекции холодового стресса и изучение механизмов адаптации организма.

Установлено, что холодовой стресс приводит к развитию различных дизрегуляционных процессов, создает благоприятные условия для радикалообразования и способствует истощению мощности антиоксидантной системы (АОС), что и конечном итоге приводит к активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) [4, 6, 12].

С целью профилактики и коррекции холодового стресса используют адаптогены различных групп, обладающие широким спектром действий и способные предотвратить активацию ПОЛ, повысить резистентность организма к повреждающим факторам внешней среды (холод) [3, 5].

Учитывая то, что наиболее перспективными средствами для облегчения адаптации к холоду теплокровного организма являются адаптогены растительного происхождения, нами в качестве препарата сравнения был взят широко известный адаптоген экстракт элеутерококка (ЭЭ). ЭЭ известен целым рядом положительных эффектов. Доказана его антиоксидантная и антигипоксантная способность и практически полное отсутствие побочных и токсических эффектов [2].

В последнее время особый интерес вызывают препараты на основе янтарной кислоты (ЯК). В этом аспекте наибольший интерес вызвал полиионный инфузионный препарат "Реамберин", входящая в его состав ЯК является продуктом пятой и субстратом шестой реакции цикла Кребса (ЦК). Этот промежуточный метаболит выступает регулятором функций живых систем, обладает мощной энергопродукцией, антигипоксическим, кардиопротекторным, дезинтоксикационным действием, демонстрирует нетипично высокий терапевтический эффект при наличии патологического процесса, способен усиливать процессы аэробного гликолиза и снижать степень окислительных процессов в ЦК [1, 7, 11].

Принимая во внимание вышеперечисленное, целью нашего исследования являлось изучение влияния реамберина на интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) и состояние антиоксидантной системы (АОС) в сравнении с элеутерококком в условиях холодового стресса.

Материалы и методы

Антиоксидантные свойства данных препаратов изучались на лабораторных животных (беспородные белые крысы-самцы), по изменению содержания продуктов ПОЛ: гидроперекисией, диеновых конъюгатов, малонового диальдегида; и компонентов АОС: церулоплазмина, каталазы, токоферола, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови и тканях крыс (сердце), подвергнутых длительному холодовому воздействию. Статистическую обработку биохимических данных проводили с использованием критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для изучения действия препаратов на организм экспериментальных животных была разработана холодовая модель эксперимента [4], в котором участвовало 9 групп животных одновременно, в каждой находилось по 10 крыс массой 200 г. Ежедневно животных в одно и то же время на 3 ч помещали в климатокамеру фирмы "Fentron" (Германия) при температуре -15°С в течение 28 дн. В работе камеры предусматривается подача воздуха для предупреждения гипоксии и создается постоянный режим охлаждения. Для оценки антиоксидантного действия определяли продукты перекисного окисления липидов и компонентов антиокислительной системы [8, 9, 10]. Забой животных производился путем декапитации на 7, 14, 21 и 28 дн. эксперимента. Схема эксперимента: 1 - интактная группа - животные находились в обычных условиях вивария; 2 - контрольная группа - животные подвергались длительному охлаждению с использованием климатокамеры "Fentron" (Германия) при температуре -15°С по 3 ч ежедневно в течение 7 дн.; 3(1) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 7 дн. животным внутрибрюшинно вводили исследуемый препарат (реамберин) в дозе 30 мг/кг, что составило 2,0 мл препарата; 3(2) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 7 дн. животные получали per os контрольный препарат (элеутерококк) в дозе 1 дг/кг, что составило 0,1 мл препарата; 4 - контрольная группа - животные подвергались длительному охлаждению в течение 14 дн.; 5(1) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 14 дн. животным внутрибрюшинно вводили реамберин в дозе 30 мг/кг; 5(2) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 14 дн. животные получали per os элеутерококк в дозе 1 дг/кг; 6 - контрольная группа - животные подвергались длительному охлаждению в течение 21 дн.; 7(1) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением и течение 21 дн. животным внутрибрюшинно вводили реамберин в дозе 30 мг/кг; 7(2) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 21 дн. животные получали per os элеутерококк в дозе 1 дг/кг; 8 - контрольная группа - животные подвергались длительному охлаждению в течение 28 дн.; 9(1) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 28 дн. животным внутрибрюшинно вводили реамберин в дозе 30 мг/кг; 9(2) - подопытная группа - непосредственно перед охлаждением в течение 21 дн. животные получали per os элеутерококк и дозе 1 дг/кг.

Результаты и обсуждение

Результаты проведенных исследований представлены в табл. 1-4. Было установлено, что воздействие низких температур на крыс сопровождается активацией ПОЛ и накоплением их продуктов в крови и тканях сердца. Доказано, что активация ПОЛ при холодовом воздействии на крыс развивается на фоне напряжения и истощения АОС крови и сердца, характерные изменения которой включают снижение активности каталазы и церулоплазмина, а также уменьшение содержания витамина Е. В условиях холодовой экспериментальной модели реамберин проявляет более выраженные антиокислительные свойства, чем элеутерококк, что выражается в снижении содержания продуктов ПОЛ в крови и сердце. При этом происходит увеличение активности компонентов АОС (каталазы, церулоплазмина, витамина Е). Кроме того, прослеживается прямая зависимость антиокислительного действия реамберина oт длительности его применения. Препарат начинает действовать уже на 14 дн. от начала эксперимента, и максимальная эффективность наблюдается к 28 дн. эксперимента, тогда как элеутерококк себя проявляет на 21-28 дн. эксперимента. Антиокислительные свойства реамберина сравнимы с антиокислительными свойствами классического адаптогена элеутерококка. Это объясняется превосходством реамберина перед элеутерококком по воздействию на некоторые показатели ПОЛ (МДА, ГПЛ, ДК).

Таблица 1. Показатели ПОЛ и АОС в сыворотке крови крыс при холодовом воздействии на фоне применения peaмберина в дозе 30 мг/кг
Группа	Церулоплазмин	ДК	ГП	МДА	Токоферол	Каталаза	ГЛ-6-ФДГ
Интактная, n=10 (1)	46,0±5,9	49,1±7,2	26,6±1,1	5,1±0,2	26,0±1,8	83,5±1,6	16,9±0,2
Контроль (холод) 7 дн., n=10 (2)	31,3±3,3 Р_1,2<0,05	77,6±5,6 Р_1,2<0,01	35,5±1,9 Р_1,2<0,01	6,6±0,1 Р_1,2<0,001	20,0±0,8 Р_1,2<0,01	68,3±3,1 _Р1,2<0,001	15,4±0,3 Р_1,2<0,001
Реамберин+холод 7 дн., n=10 (3)	51,9±3,4 Р_2,3<0;001	45,1±6,1 Р_2,3=0,001	30,5±1,7 Р_2,3>0,05	5,0±0,3 Р_2,3<0,001	27,1±1,8 Р_2,3<0,01	77,5±2,4 Р_2,3<0,05	16,8±0,4 Р_2,3<0,02
Контроль (холод) 14 дн., n=10 (4)	30,4±2,8 Р_1,4<0,05	71,5±4,3 Р_1,4<0,02	33,2±1,7 Р_1,4<0,01	6,4±0,3 Р_1,4<0,01	21,1±1,1 Р_1,4<0,05	65,8±2,9 Р1,4<0,001	15,7±0,2 Р_1,4<0,001
Реамберин+холод 14 дн., n=10 (5)	42,9±2,3 Р_4,5<0,01	37,2±2,2 Р_4,5<0,001	27,5±0,8 Р_4,5<0;01	5,1±0,2 Р_4,5<0,01	26,9±1,5 Р_4,5<0,01	82,2±3,7 Р_4,5<001	16,8±0,2 Р_4,5<0,01
Контроль (холод) 21 дн., n=6 (6)	31,0±2,4 Р_1,6<0,05	75,1±5,2 Р_1,6<0,02	32,4±1,9 Р_1,6<0,02	6,5±0,2 Р_1,6<0,001	20,1±1,2 Р_1,6<0,02	68,5±3,4 Р_1,6<0,001	14,9±0,4 Р_1,6<0,001
Реамберин +холод 21 дн., n=6 (7)	54,7±5,0 Р_6,7<0,001	48,0±4,6 Р_6,7<0,01	26,5±0,4 Р_6,7<0,01	5,3±0,2 Р_6,7<0,001	27,8±2,1 Р_6,7<0,01	89,8±4,1 Р_6,7<0,001	16,5±0,2 Р_6,7<0,01
Контроль (холод) 28 дн., n=6 (8)	33,1±2,6 Р_1,8>0,05	73,6±6,0 Р_1,8<0,02	35,2±2,1 Р_1,8<0,01	6,7±0,2 Р_1,8<0,001	19,1±0,8 Р_1,8<0,01	68,4±4,2 Р_1,8<0,01	15,0±0,3 Р_1,8<0,001
Peaмберин+холод 28 дн., n=6 (9)	56,2±4,8 Р_8,9<0,001	39,2±5,6 Р_8,9<0;001	24,2±1,4 Р_8,9<0,001	5,2±0,3 Р_8,9<0,001	25,1±1,2 Р_8,9<0,001	88,5±2 9 Р_8,9<0,001	16,9±0,3 Р_8,9<0,001

Таблица 2. Показатели ПОЛ и АОС в сыворотке крови крыс при холодовом воздействии на фоне применения элеутерококка в дозе 0,1 дг/кг
Показатели (группа)	Церулоплазмин	ДК	ГП	МДА	Токоферол	Каталаза	ГЛ-6-ФДГ
Интактная, n=10 (1)	46,0±5,9	49,1±7,2	26,6±1,1	5,1±0,2	26,0±1,8	83,5±1,6	16,9±0,2
Контроль (холод) 7 дн., n=10 (2)	31,3±3,3 р_1,2<0,05	77,6±5,6 р_1,2<0,01	35,5±1,9 р_1,2<0,01	6,6±0,1 р_1,2<0,001	20,0±0,8 р_1,2<0,01	68,3±3,1 р_1,2<0,001	15,4±0,3 р_1,2<0,001
Элеутерококк+холод, 7 дн., n=10 (3)	48,0±4,9 p_2,3<0,02	47,4±5,1 p_2,3<0,01	32,1±1,2 p_2,3>0,05	5,4±0,3 p_2,3<0,01	27,8±1,7 p_2,3<0,01	76,2±2,0 p_2,3<0,05	16,2±0,2 p_2,3<0,05
Контроль (холод) 14 дн., n=10 (4)	30,4±2,8 p_1,4<0,05	71,5±4,3 p_1,4<0,02	33,2±1,7 p_1,4<0,01	6,4±0,3 p_1,4<0,01	21,1±1,1 p_1,4<0,05	65,8±2,9 p_1,4<0,001	15,7±0,2 p_1,4<0,001
Элеутерококк+холод 14 дн., n=10 (5)	48,5±5,1 p_4,5<0,01	46,9±3,7 p_4,5<0,001	29,5±1,7 p_4,5>0;05	5,6±0,2 p_4,5<0,05	25,7±1,6 p_4,5<0,05	78,1±3,5 p_4,5<0,02	16,5±0,3 p_4,5<0,05
Контроль (холод) 21 дн., n=6 (6)	31,0±2,4 p_1,6<0,05	75,1±5,2 p_1,6<0,02	32,4±1,9 p_1,6<0,02	6,5±0,2 p_1,6<0,001	20,1±1,2 p_1,6<0,02	68,5±3,4 p_1,6<0,001	14,9±0,4 p_1,6<0,001
Элеутерококк+холод 21 дн., n=6 (7)	48,1±4,9 p_6,7<0,01	39,5±8,6 p_6,7<0,01	26,9±0,7 p_6,7<0,02	5,3±0,3 p_6,7<0,01	23,8±1,5 p_6,7<0,05	78,5±2,8 p_6,7<0,05	16,1±0,2 p_6,7<0,02
Контроль (холод) 28 дн., n=6 (8)	33,1±2,6 p_1,8>0,05	73,6±6,0 p_1,8<0,02	35,2±2,1 p_1,8<0,01	6,7±0,2 p_1,8<0,001	19,1±0,8 p_1,8<0,01	68,4±4,2 p_1,8<0,01	15,0±0,3 p_1,8<0,001
Элеутерококк+холод 28 дн., n=6 (9)	49,6±5,1 p_8,9<0,01	51,9±6,2 p_8,9<0,05	26,6±2,4 p_8,9<0,02	5,4±0,5 p_8,9<0,05	26,1±2,2 p_8,9<0,02	81,4±2,9 p_8,9<0,02	16,5±0,3 p_8,9<0,01

Таблица 3. Показатели ПОЛ и АОС в ткани сердца крыс при холодовом воздействии на фоне применения реамберина в дозе 30 мг/кг
Группа	ДК	ГП	Токоферол
Интактная, n=10 (1)	46,8±0,7	62,8±1,6	60,6±0,5
Контроль (холод) 7 дн., n=10 (2)	67,5±1,1 р_1,2<0,001	82,9±0,5 р_1,2<0,001	42,1±2,2 р_1,2<0,001
Реамберин+холод 7 дн., n=10 (3)	52,3±1,2 p_2,3<0,001	69,7±2,1 p_2,3<0,001	45,5±1,4 p_2,3>0,05
Контроль (холод) 14 дн., n=10 (4)	69,2±3,2 p_1,4<0,001	84,0±2,5 p_1,4<0,001	40,1±2,1 p_1,4<0,001
Реамберин+холод 14 дн., n=10 (5)	52,7±1,3 P_4,5<0,001	70,0±1,3 P_4,5<0,001	46,2±1,2 P_4,5<0,05
Контроль (холод) 21 дн., n=6 (6)	66,8±2,7 p_1,6<0,001	86,3±3,6 p_1,6<0,001	41,0±1,9 p_1,6<0,001
Реамберин +холод 21 дн., n=6 (7)	52,7±1,1 p_6,7<0,001	72,7±2,1 p_6,7<0,01	49,4±0,9 p_6,7<0,01
Контроль (холод) 28 дн., n=6 (8)	70,9±3,2 p_1,8<0,001	85,3±3,0 p_1,8<0,001	38,2±2,1 p_1,8<0,001
Peaмберин+холод 28 дн., n=6 (9)	55,7±0,8 p_8,9<0,001	67,2±1,6 p_8,9<0,001	49,3±1,9 p_8,9<0,001

Таблица 4. Показатели ПОЛ и АОС в ткани сердца крыс при холодовом воздействии на фоне применения элеутерококка в дозе 0,1 дг/кг
Группа	ДК	ГП	Токоферол
Интактная, n=10 (1)	46,8±0,7	62,8±1,6	60,6±0,5
Контроль (холод) 7 дн., n=10 (2)	67,5±1,1 р_1,2<0,001	82,9±0,5 р_1,2<0,001	42,1±2,2 р_1,2<0,001
Реамберин+холод 7 дн., n=10 (3)	52,3±1,2 p_2,3<0,001	69,7±2,1 p_2,3<0,001	45,5±1,4 p_2,3>0,05
Контроль (холод) 14 дн., n=10 (4)	69,2±3,2 p_1,4<0,001	84,0±2,5 p_1,4<0,001	40,1±2,1 p_1,4<0,001
Реамберин+холод 14 дн., n=10 (5)	52,7±1,3 P_4,5<0,001	70,0±1,3 p_4,5<0,001	46,2±1,2 P_4,5<0,05
Контроль (холод) 21 дн., n=6 (6)	66,8±2,7 p_1,6<0,001	86,3±3,6 p_1,6<0,001	41,0±1,9 p_1,6<0,001
Реамберин +холод 21 дн., n=6 (7)	52,7±1,1 p_6,7<0,001	72,7±2,1 p_6,7<0,01	49,4±0,9 p_6,7<0,01
Контроль (холод) 28 дн., n=6 (8)	70,9±3,2 p_1,8<0,001	85,3±3,0 p_1,8<0,001	38,2±2,1 p_1,8<0,001
Peaмберин+холод 28 дн., n=6 (9)	55,7±0,8 p_8,9<0,001	67,2±1,6 p_8,9<0,001	49,3±1,9 p_8,9<0,001

Установлено статистически значимое различие изменений показателей продуктов ПОЛ и компонентов АОС при коррекции реамберином в сравнении с элеутерококком. Таким образом, доказана эффективность коррекции холодового стресса при экспериментальном применении реамберина.

Выводы

Впервые проведен сравнительный анализ антиоксидантных свойств реамберина и классического адаптогена элеутерококка по их воздействию на процессы ПОЛ в условиях холодового стресса.
Результаты исследования дают основание рекомендовать реамберин в качестве антиоксиданта, а также регулятора адаптационных реакций организма при воздействии низких температур.

Литература

1. Афанасьев В.В. Клиническая фармакология реамберина (очерк): пос. для врачей. - СПб., 2005. - 44 с.
2. Дардымов И.В. Адаптогены - лекарства от стресса // Химия и жизнь. - 1976. - №3. - С. 67-72.
3. Девяткина Т.А. Защитные эффекты антиоксидантов при холодовом стрессе // Молекулярные и клеточные механизмы старения. - Киев, 1981. - С. 56-57.
4. Доровских В.А. Фармакологическая коррекция холодового воздействия в эксперименте: дис. ... д-ра мед. наук. - Б., 1987. - С. 55-56.
5. Доровских В.А., Коршунова Н.В., Красавина Н.П. и др. Адаптогены и холодовой стресс: вчера, сегодня, завтра. - М., 2006. - С. 206.
6. Куликов В.Ю., Семенюк А.В., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор. Новосибирск, 1988.
7. Оболенский С.В. Реамберин - новое средство для инфузионной терапии в практике медицины критических состояний: метод. рек. - СПб., 2003. - 23 с.
8. Романцова Л.А., Стальная И.Д. Метод определения гидроперекисей липидов с помощью тиоционата аммония // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1999. - С. 64-66.
9. Стальная И.Д., Горишвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
10. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных жирных кислот // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С. 63-64. 11. Яковлев А.Ю. Реамберин в практике инфузионной терапии критических состояний: практ. рек. - СПб., 2008. - 32 с.
11. Naper G., Genazzani. E., Martignoni F. Petraglia (eds). Stress and the Aging Brain, Inlegrative Mechanisms. New York, Raven Press, 1990.