2011 год № 1

Резюме:

Ключевые слова:

Summary:

Key words:

Введение

В результате многолетних исследований в области синтеза и изучения противовирусных свойств производных нуклеиновых оснований нами был открыт новый класс противовирусных агентов ненуклеозидной природы - производных 9-(2-арилоксиэтил) аденина, которые обладают способностью подавлять цитопатический эффект ВИЧ-1 в наномолярных концентрациях и одновременно проявлять высокую активность в отношении цитомегаловируса человека, вируса Коксаки типа В и ряда других вирусов in vitro [2]. Ряд соединений, обладающих наиболее высокой активностью, сочетающейся с оригинальным спектром противовирусного действия, прогнозируемой низкой токсичностью и простым химическим строением, определяющим перспективы возможного промышленного выпуска химических субстанций этих препаратов, был выбран для углубленного доклинического изучения. Наряду с проведением токсикологических исследований нами было изучено общефармакологическое действие 9-[2-(4-изопропилфенокси]этил)аденина (лабораторный шифр ВМА-99-82), в частности, его влияние на сердечно-сосудистую и центральную нервную систему

Материалы и методы

Все эксперименты были выполнены на 90 крысах-самцах массой 180-250 г. При проведении всех экспериментов над животными руководствовались базисными нормативными Рекомендациями Комитета по экспериментальной работе с использованием животных при Минздравсоцразвития России, Рекомендациями ВОЗ, "Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (1985)", а также, согласно ГОСТ 3 51000.3-96 и ГОСТ 3 5100.4-96, правилами GLP, Приказом МЗ РФ от 19.06.2003 г. №267 "Об утверждении правил лабораторной практики РФ", а также осуществляли с разрешения Регионального независимого этического комитета ГУ "Волгоградский научный центр РАМН и АВО". В настоящей работе использованы методические подходы, соответствующие требованиям, изложенным в "Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" (Р.У. Хабриева, 2005). [3]. При исследовании психотропной активности соединение ВМА-99-82 вводилось животным внутрибрюшинно в дозах 0,1; 1; 5; 10 и 50 мг/кг в изотоническом растворе хлорида натрия с добавлением твина за час до эксперимента. Животным контрольной группы вводился изотонический раствор хлорида натрия. Для выявления антидепрессивной активности использовался тест принудительного плавания [4]. Исследование других видов психотропной активности проводилось с использованием общепринятых методик "открытого поля", "плюс-лабиринта", "условной реакции пассивного избегания" [3].

Дополнительное исследование антидепрессивной активности соединения проводили на модели резерпиновой

депрессии. При этом исследовалось влияние однократного введения вещества в дозах 1; 5 и 10 мг/кг на активность крыс в тесте принудительного плавания после 2-дневного введения резерпина (10 мг/кг). В качестве препарата сравнения был использован трициклический антидепрессант имипрамин (10 мг/кг). Описанные в клинике побочные эффекты терапии антидепрессантами, в том числе их неблагоприятное влияние на сердечно-сосудистую систему, являются, как правило, следствием их синаптического действия. Так, три- и тетрациклические антидепрессанты, обладающие альфа-адреноблокирующей активностью, могут вызывать ортостатическую гипотензию [1]. А их холинолитический эффект характеризуется развитием тахикардии [5]. Поэтому мы посчитали целесообразным провести исследование влияния ВМА-99-82 на основные показатели деятельности сердечно-сосудистой системы - артериальное давление и частоту сердечных сокращений. Для изучения влияния ВМА-99-82 на гемодинамику крыс применялся прямой способ регистрации систолического артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС), который осуществлялся через введенный в бедренную артерию полиэтиленовый катетер. АД и ЧСС измерялись у наркотизированных животных (нембутал 40 мг/кг) при помощи электронного манометра производства компании "Elema-Siemens" (Швеция - Германия) и компьютерного гемодинамического анализатора на базе программы BEAT. После регистрации исходных значений АД и ЧСС вводили соединение и повторяли измерения через 1; 30 и 60 мин после введения. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы Biostatistics 4.03 с использованием однофакторного дисперсионного анализа и критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони.

Результаты и обсуждение

При изучении психотропной активности введение ВМА-99-82 в дозах 1; 5; 10 и 50 мг/кг вызывало достоверное снижение времени иммобилизации крыс в тесте принудительного плавания (рисунок). Наибольшее сокращение времени иммобилизации - 15,4±4,2 и 14,5±5,0 с соответственно наблюдалось в группах крыс, получавших соединение ВМА-99-82 в дозах 1 и 5 мг/кг, и несколько уменьшалось с увеличением дозы. Снижение времени иммобилизации в тесте принудительного плавания традиционно считается предиктором антидепрессивной активности, однако может быть обусловлено и психостимулирующим влиянием вводимого вещества. Отсутствие увеличения локомоторной активности крыс, получавших ВМА-99-82 во всех исследованных дозах, в тесте открытого поля позволяет исключить психостимулирующее действие соединения и трактовать обнаруженный эффект как антидепрессивный.

Рис. 1. Влияние ВМА-99-82 на время иммобилизации крыс в тесте принудительного плавания; * - достоверные различия с контрольной группой при р<0,05 (n=10). Критерий КрускалаУоллиса, критерий Даннета для множественных сравнений

Для подтверждения этого предположения было проведено изучение антидепрессивной активности соединения на модели резерпиновой депрессии. Симпатолитик резерпин вызывает истощение запасов моноаминов в нейронах ЦНС, что является патогенетической основой депрессивноподобного состояния, развивающегося на фоне введения этого препарата. В качестве метода оценки изменения эмоционального состояния животных был использован плавательный тест. В тесте принудительного плавания, проведенном после 2-дневного введения резерпина, в контроле (животным вводился физиологический раствор хлорида натрия) время иммобилизации составило 91,9±18,8 с, что в 6 раз превышало продолжительность иммобилизации в группе "здоровых" животных, не получавших резерпин. Введение имипрамина приводило к восстановлению активности животных до нормального уровня (табл. 1). Приведенные данные свидетельствуют о развитии депрессивноподобных изменений в поведении животных и об адекватности использования модели резерпиновой депрессии для изучения антидепрессивного эффекта исследуемых соединений. Введение соединения ВМА-99-82 в дозах 1; 5 и 10 мг/кг животным, находящимся в состоянии резерпиновой депрессии, приводило к достоверному сокращению времени иммобилизации, т.е. к антидепрессивному эффекту (табл. 1). При этом эффект соединения в дозе 10 мг/кг был сходен с действием препарата сравнения имипрамина, а в дозах 1 и 5 мг/кг превосходил его (табл. 1).

В тестах приподнятого крестообразного лабиринта, выработки условной реакции пассивного избегания и определения порога переносимости электроболевого раздражения достоверных изменений в поведении животных не было выявлено, что свидетельствует об отсутствии у исследованного соединения анксиолитической, ноотропной и анальгетической активности. При исследовании влияния соединения ВМА-99-82 на деятельность сердечно-сосудистой системы исходные показатели САД и ЧСС крыс контрольной группы и крыс, получавших соединение, достоверно не отличались (табл. 2). В контрольной группе животных не было обнаружено достоверных изменений САД и ЧСС через 1; 30 и 60 мин после введения физиологического раствора, что свидетельствует об отсутствии влияния посторонних факторов на основные показатели деятельности сердечно-сосудистой системы во время проведения эксперимента. Введение ВМА-99-82 в дозах 10 и 50 мг/кг также не оказывало достоверного влияния на систолическое АД и частоту сердечных сокращений крыс на всем протяжении периода наблюдения (табл. 2).

Выводы

1. При изучении психотропной активности ВМА-9982 был обнаружен антидепрессивный эффект в дозах 1; 5; 10 и 50 мг/кг, подтвержденный также на модели резерпиновой депрессии. Изучение гемодинамических эффектов ВМА-99-82 в дозах 10 и 50 мг/кг не выявило его влияния на показатели артериального давления и частоты сердечных сокращений при однократном введении, что, несомненно, является преимуществом.
2. Наличие антидепрессивной активности у соединения ВМА-99-82 может служить дополнительным преимуществом для создания его в перспективе в качестве противовирусного препарата. Это особенно актуально при тяжелых вирусных инфекциях (ВИЧ, цитомегаловирусная инфекция), когда тяжесть состояния больного часто приводит к развитию депрессивных расстройств.

Литература

1. 1. Малин Д.И., Медведев В.М. Побочное действие антидепрессантов // Психиатрия и психофармакотерапия. - 2002. - Т. 4, №5. - С. 190-194.
2. 2. Петров В.И., Озеров А.А., Новиков М.С. и др. Новый класс ненуклеозидных ингибиторов вирусной репродукции - производные 9-[2-фенокси(бензилокси) этил]аденина // Бюлл. ВНЦ РАМН и АВО. - 2006. - №1. - С. 15-16.
3. 3. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.
4. 4. Porsolt R.D., Le Pichon M., Jalfre M. Depression: a new animal model sensitive to antidepressant treatments // Nature. - 1977. - Vol. 266, №21. - P. 730-732.
5. 5. Remick R.A. Diagnosis and management of depression in primary care: a clinical update and review // CMAJ. - 2002. - Vol. 167, №11. - P. 1253-1260.