2011 год № 2

Резюме:

Ключевые слова:

Summary:

Key words:

Введение

Эндогенные молекулярные регуляторы пептидной природы привлекают внимание исследователей как особый класс биологически активных веществ. Являясь наиболее древней формой регуляторов, они обнаружены как у эукариот, так и у прокариот, идентифицированы практически во всех тканях млекопитающих, включая человека. Высокая биологическая активность регуляторных пептидов (РП) определила значительный интерес к ним современной фармакологии, экспериментальной и клинической медицины.

Вследствие высокой эффективности (эффективны в наномолярных и ниже концентрациях), низкой токсичности (не являются ксенобиотиками, поскольку состоят из присутствующих в организме аминокислот), обладания практически неисчерпаемыми возможностями для драгдизайна, олигопептиды считаются одними из наиболее перспективных классов молекул для нанобиотехнологий, в том числе для создания нового поколения лекарственных средств. Доходность современных лекарственных препаратов пептидной природы в 10 раз выше, чем обычных препаратов [5].

Центральные и периферические механизмы системы РП, регулирующие процессы морфофункционального становления органов, начинают действовать на ранних этапах онтогенеза. Изучение механизмов сигнальной трансдукции, определяющих специфику физиологических и патофизиологических эффектов РП в различных клеточных популяциях, является одной из современных тенденций исследования этих веществ. В настоящее время лидирующее положение среди биологических передатчиков сигнала занял новый класс соединений - активные кислородные метаболиты (АКМ), в том числе свободнорадикальной природы. Вопрос об особенностях участия АКМ в механизмах реализации морфогенетических эффектов пептидов остается во многом открытым.

Решение данного вопроса имеет значение не только в фундаментальном аспекте, но и в прикладном - полученная информация дает возможность управления этими механизмами и представляет интерес с позиций применения новых биотехнологий. По мнению В.И. Дейгина (2009), именно пептидная биотехнология - область отечественной науки и практического внедрения, которая еще не потеряла возможности быть конкурентоспособной на мировом уровне [5].

Цель работы - изучение характера влияния регуляторных пептидов на один из основных морфогенетических показателей - активность синтеза ДНК в различных клеточных популяциях, а также анализ АКМ-механизмов действия регуляторных пептидов.

Исследования проводились совместно сотрудниками Хабаровского филиала ДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства и Дальневосточного государственного медицинского университета. Выполнение данной работы стало возможным благодаря взаимодействию с лабораторией синтеза пептидов Российского кардиологического научно-производственного комплекса Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (зав. лаб. проф., д-р мед. наук Ж.Д. Беспалова) и лабораторией химии пептидов Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (вед. науч. сотр. - проф., д-р мед. наук В.И. Дейгин). Пептиды синтезировались с применением классического и твердофазного методов синтеза. Очистка и контроль производились с помощью ВЭЖХ (высокоэффективной обращеннофазовой жидкостной хроматографии) и тонкослойной хроматографии, в условиях, индивидуально подобранных для каждого аналога. Содержание пептидов в сухом веществе составляло не менее 97,5%. Вещества идентифицированы данными метода 1Н-ЯМР спектроскопии высокого разрешения (500 МГц).

Материалы и методы

Работа носила клинико-экспериментальный характер. Морфогенетическую активность и механизмы ее реализации у представителей семейств вазоактивных и опиоидных пептидов, а также у одного из морфогенов Hydra attenuata, так называемого пептидного морфогена гидры (ПМГ), изучали in vivo и in vitro, в условиях нормы и патологии. Процессы синтеза ДНК оценивали с помощью авторадиографии с 3Н-тимидином. Тимидин вводили в дозе 0,6 мкКи/г массы тела крысам и 1 мкКи/г массы тела мышам. Радиоавтографы изготавливали по принятой в лаборатории методике. Использовали фотоэмульсию двух видов: производства НИИХИМФОТО и KODAK Autoradigraphy Emulsion, (Type NTB, for Light Microscope Autoradiography). Индекс меченых ядер (ИМЯ) определяли на основании просмотра 2,5-3 тыс. клеток и выражали в процентах. Интенсивность метки (ИМ) подсчитывали как среднее количество зерен серебра над 50 мечеными клетками.

Исследования процессов пролиферации в культуре дермальных фибробластов белых крыс проводились на первичной культуре. Обработка регуляторными пептидами осуществлялась путем добавления раствора пептида в культуральную среду в концентрации 100 мкг/мл с последующей инкубацией в течение 3 ч. Затем, для приготовления радиоавтографов, клеточные монослои помещали в раствор 3Н-тимидина (1 мкКи/мл) на 1 ч. После отмывки монослоев в растворе Хэнкса и фиксации в 96% этаноле производили приготовление радиоавтографов по принятой в лаборатории методике.

Определение показателя пролиферации эпителия слизистой оболочки ЖКТ человека - экспрессию антигена Ki-67 проводили с помощью иммуногистохимической полимерной технологии Novolink (Polymer Detection System), Novocastra™. Индекс экспрессии антигена Ki-67 выражался в процентах. Подсчет индекса метки Ki-67позитивных клеток после окрашивания гематоксилином осуществлялся в процентах из расчета на 500 подсчитанных клеток. В ряде экспериментов использовались методы морфометрического, биохимического и хемилюминесцентного анализов, а также ингибиторный анализ (блокада синтеза оксида азота с помощью L-NAME, блокада опиоидных рецепторов с помощью налоксона гидрохлорида). Изучение особенностей влияния регуляторных пептидов на синтез ДНК в эпителиоцитах и гладких миоцитах развивающихся воздухоносных путей проводилось на новорожденных белых крысах [11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 28, 29]. Пептиды вводили крысам внутрибрюшинно, в дозе 100 мкг/кг, однократно (на 6 сут постнатального развития) или пятикратно (ежедневно, с 2 по 6 сут жизни).

Результаты и обсуждение

При оценке эффектов воздействия представителей семейства вазоактивных пептидов эндотелина-1 (ЭТ-1) и ангиотензина II (АТ-II), обладающих вазо- и бронхоконстрикторными свойствами, выявилось сходство их эффектов с действием L-NAME. Оба пептида и ингибитор NOS увеличивали количество ДНК-синтезирующих ядер гладких миоцитов респираторного тракта. Совпадение морфогенетических эффектов ЭТ1, АТ-II и L-NAME обусловлено сходством опосредующих эти эффекты АКМ (NO в том числе) зависимых механизмов. Результатом воздействия ЭТ-1, АТ-II и LNAME на биогенез АКМ было снижение NOS-активности эпителиоцитов воздухоносных путей и развитие органного и организменного оксидативного стресса. Если в отношении ДНК-синтетической активности гладких миоцитов позитивный эффект независимо от режима воздействия проявили оба пептида и L-NAME, то в отношении этого процесса в эпителиоцитах был получен весь спектр возможных эффектов: от позитивного (АТ-II - независимо от режима воздействия, ЭТ-1 - при однократном воздействии) до негативного (ЭТ-1 и L-NAME - при 5-кратном воздействии) и отсутствия эффекта (LNAME - при однократном воздействии). Если эффекты ЭТ-1 и АТ-II совпадали с последствиями воздействия L-NAME, а в условиях предварительного введения L-NAME потенцировали эффекты последнего, то атриальный натрийуретический пептид (АНП) и пептидный морфоген гидры (ПМГ) действовали противоположным образом. При обоих режимах воздействия АНП и ПМГ проявили себя как негативные регуляторы ДНК-синтетической активности гладких миоцитов. При этом снижение ДНК-синтезирующей способности гладких миоцитов сочеталось с увеличением активности NOS в эпителиоцитах. Предварительное введение L-NAME, отменив эффекты АНП и ПМГ в отношении NOS эпителиоцитов, одновременно нивелировало ингибирующие эффекты пептидов в отношении синтеза ДНК в гладких миоцитах.

Данные, полученные при исследовании NO-механизмов действия пептидов, обладающих как позитивным (ЭТ-1, АТ-II), так и негативным (АНП, ПМГ) эффектами в отношении активности синтеза ДНК в гладких миоцитах воздухоносных путей, оценены как свидетельство в пользу наличия паракринной роли эпителиального NO в сигнальной трансдукции данных эффектов. Активность представителей семейства опиоидных пептидов отличалась вариабельностью. Наибольшую активность проявили μ-агонисты. Одной из особенностей последствий системной активации μ-опиоидных рецепторов высокоселективным агонистом дерморфином А10 и селективным DAGO является усиление эффектов при возрастании μ-селективности исследуемых агонистов. Кроме того, только при активации μ-рецепторного звена эндогенной опиоидной системы зарегистрирована инверсия эффектов в отношении синтеза ДНК в гладких миоцитах респираторного тракта и биогенеза АКМ в легких, обусловленная изменением режима воздействия μ-агониста. Однократное введение DAGO угнетало синтез ДНК и продукцию АКМ, 5-кратное - стимулировало. Разница "угнетение - стимуляция" в эффектах DAGO, зависящая от кратности введения пептида, исчезала на фоне предварительного введения L-NAME. Независимо от режима воздействия, в условиях ингибиции NOS, DAGO, подобно АНП и ПМГ, демонстрировал корригирующие эффекты. Агонист κ-опиоидных рецепторов динорфин А(1-13) увеличивал количество ДНК-синтезирующих эпителиоцитов при обоих режимах воздействия и ускорял прохождение S-фазы клеточного цикла в гладких миоцитах при пятикратном введении.

Анализ с помощью L-NAME позволил установить наличие NO-компоненты в механизмах реализации эффектов динорфина А (1-13). Причем, в зависимости от исходного уровня продукции NO, только у динорфина А (1-13) были зарегистрированы разнонаправленные эффекты в отношении биогенеза АКМ в легких. На интактном фоне динорфин активизировал процессы детоксикации АКМ, в условиях предварительного воздействия L-NAME, наоборот, стимулировал процессы декомпенсированного накопления АКМ. Однократное введение агониста δ-/μ-опиоидных рецепторов - даларгина не влияло на синтез ДНК и активность NOS в исследуемых клеточных популяциях, но снижало продукцию АКМ в легких. Пятикратное введение ускоряло прохождение S-фазы клеточного цикла в эпителиоцитах на фоне угнетения продукции АКМ в легких и крови. Стимулирующий эффект даларгина в отношении антиоксидантной и антирадикальной систем легких и крови усиливался с увеличением кратности введения пептида.

Данный эффект сохранялся в условиях нарушения базальной продукции NO, смягчая последствия воздействия L-NAME в отношении синтеза ДНК и активности NOS внутри эпителиально-гладкомышечного компартмента слизистой воздухоносных путей. Цитопротективные свойства даларгина позволили в качестве официнального препарата с успехом применять его (уже более 20 лет) в разных областях медицины. В настоящее время наблюдается тенденция к расширению показаний применения даларгина в клинической практике, в том числе попытки использования его в педиатрии. Имеется положительный опыт лечения даларгином бронхиальной астмы у детей. Использование даларгина в комбинации с базисными препаратами приводило к быстрому обратному развитию клинических симптомов заболевания, улучшало показатели внешнего дыхания, снижало частоту обострений и увеличивало продолжительность периода ремиссии [2]. На основании наших данных можно предположить, что позитивный эффект применения даларгина при лечении бронхиальной астмы у детей имеет следующие патогенетические основы: коррекцию нарушений ДНК-синтетической активности эпителиоцитов и гладких миоцитов воздухоносных путей, оптимизацию изоэнзимного баланса в системе NO - NOS и увеличение активности систем детоксикации АКМ на тканевом, органном и организменном уровнях. Эксперименты с антагонистом опиоидных рецепторов - налоксоном позволили установить вовлеченность опиоидных рецепторов в реализацию выявленных нами биологических эффектов исследуемых μ-, κ- и δ-опиоидных агонистов.

Результаты наших исследований расширяют представления о молекулярных механизмах патологического ремоделирования воздухоносных путей на раннем этапе функционирования дыхательного аппарата. Обнаруженные нами доказательства наличия эпителиозависимой регуляции ДНК-синтетической активности гладких миоцитов дают основание считать эпителиоциты эффективной мишенью при фармакологической коррекции нарушений пролиферативного потенциала клеток эпителиально-гладкомышечного компартмента слизистой трахеобронхиальной системы. В данном случае, наряду с прочими коррекционными мероприятиями, представляется целесообразным применение современных технологий доставки лекарственных веществ непосредственно в эпителиальную выстилку дыхательных путей.

Данные о высокой эффективности агонистов μ- и δ-опиоидных рецепторов в отношении коррекции нарушений синтеза ДНК послужили основанием для проведения серии экспериментов с одним из синтетических аналогов дерморфина - седатином (H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-GlyOH) [4, 9, 10, 22, 23, 24]. Этот аргинин-содержащий пептид является смешанным агонистом периферических μ-/ δ-рецепторов и антагонистом центральных μ1-рецепторов эндогенной опиоидной системы. В настоящее время на базе седатина создается лекарственная форма. Препарат является официнальным в ветеринарии и проходит этап предклинических испытаний. Тестирование морфогенетической активности седатина проводилось нами на новорожденных белых крысах, подвергнутых пренатальной гипоксии. Состояние гипоксии моделировали ежедневным 4-часовым пребыванием беременных самок-крыс в барокамере СБК-49 ("высота" 9000 м, парциальное давление кислорода 42 мм рт.ст.), с 14 по 19 дн. гестации. Пептид вводили внутрибрюшинно, в дозе 100 мкг/кг ежедневно, с 2 по 6 сут постнатального развития. Установлено наличие митогенного эффекта пептида в отношении эпителиоцитов респираторного тракта, выявлена способность повышать уровни антиоксидантной защиты в легких и крови 7-суточных крыс, развивавшихся в условиях нормоксии эмбриогенеза. У животных, подвергнутых пренатальной гипоксии, выявлено угнетение синтеза ДНК в эпителиоцитах и активация - в гладких миоцитах респираторного тракта, при этом в легких и крови имеет место декомпенсированное накопление АКМ. Полученные нами данные подтверждают концепцию о формировании постгипоксического структурного следа дизадаптации в системе органов дыхания. В этой экспериментальной ситуации седатин проявлял выраженные антиоксидантные антирадикальные свойства, нивелировал постгипоксические проявления оксидативного стресса и корригировал нарушения синтеза ДНК.

Для экстраполяции данных о протективных антиоксидантных эффектах седатина на клинический уровень проведено исследование биогенеза АКМ у детей с хроническими воспалительными заболеваниями легких, сочетанными с пороками развития (гипо- и дисплазией легких). При этой патологии формирование оксидативного стресса на клеточно-мембранном, органном и организменном уровнях сопряжено с нарушениями кислород-зависимого метаболизма гранулоцитов. В эксперименте in vitro определен выраженный корригирующий эффект седатина (в концентрации 10^-8 М) в отношении процессов генерации АКМ гранулоцитами цельной крови у детей с данной патологией. Безаргининовый аналог седатина (H-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH), протестированный в аналогичных экспериментах in vivo и in vitro, активности в отношении исследуемых процессов не проявил.

Таким образом, нами экспериментально in vivo и in vitro обоснована целесообразность разработки новых лекарственных средств на основе олигопептида H-ArgTyr-D-Ala-Phe-Gly-OH в качестве цитопротекторов и антиоксидантов нового поколения для применения в пульмонологической педиатрической практике при хронических воспалительных заболеваниях легких. Способность аргининсодержащего олигопептида нивелировать разнонаправленные изменения (снижение - в эпителиоцитах, увеличение - в гладких миоцитах) активности синтеза ДНК представляет несомненный практический интерес: открывает перспективу создания препаратов направленного действия (с доставкой к органу-мишени с помощью ингаляционных методов), корригирующих процессы патологического ремоделирования воздухоносных путей.

Одним из облигатных условий апробации потенциальных фармакологических препаратов, в данном случае цитопротекторов и антиоксидантов, является подтверждение их эффектов и отсутствие токсических проявлений на нескольких видах животных объектов, в том числе и с учетом онтогенетического аспекта. В рамках этой задачи, а также с целью сравнения механизмов влияния аргининсодержащих пептидов - даларгина и седатина на процессы пролиферации, проведен эксперимент на половозрелых белых мышах и крысах [6, 7, 8, 31, 32, 34]. Установлено, что введение даларгина (Tyr-D-Ala-GlyPhe-Leu-Arg) белым крысам-самцам (внутрибрюшинно, в дозе 100 мкг/кг ежедневно в течение 5 сут) стимулировало процессы синтеза ДНК в эпителии слизистой оболочки желудка (СОЖ) и повышало активность локальной и системной антиоксидантной защиты. Эффекты даларгина отменялись ингибитором NO-синтаз L-NAME. Аналог даларгина, лишенный аминокислоты аргинина (Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu), не вызывал изменений исследуемых показателей. Выявлен протективный эффект даларгина при гастропатии, вызванной приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП-гастропатии): введение даларгина нормализовало процессы пролиферации в эпителии и уменьшало выраженность оксидативного стресса. L-NAME полностью нивелировал корригирующее влияние даларгина у животных с НПВП-гастропатией. Введение безаргининового аналога даларгина не оказывало позитивного влияния на состояние слизистой оболочки желудка. Аналогично действовал седатин. Пятикратное введение седатина крысам (100 мкг/кг, внутрибрюшинно) стимулировало синтез ДНК в эпителии СОЖ и снижало уровень свободнорадикального окисления на органном уровне. Протективный эффект при экспериментальной НПВП-гастропатии был обусловлен усилением пролиферации эпителиоцитов СОЖ и оптимизацией процессов свободнорадикального окисления. Эффекты седатина отменялись предварительным введением L-NAME. Безаргининовый аналог в отношении исследуемых процессов активности не проявлял.

Таким образом, во всех ситуациях прослеживались универсальные механизмы, реализующие морфогенетические эффекты аргинин-содержащих пептидов: минимизация проявлений оксидативного стресса и активация системы NOS-NO. Еще раз подчеркнем, что доказательством участия NOS-NO в реализации морфогенетической активности седатина и даларгина являются результаты опытов с безаргининовыми аналогами этих пептидов и эксперименты с блокадой NOS, в которых продемонстрирована отмена действия пептидов на исследуемые процессы.

Следует отметить, что сходство морфогенетических эффектов даларгина и седатина не является абсолютным. В экспериментах in vitro седатин и его безаргининовый аналог не оказывали влияния на процессы синтеза ДНК в дермальных фибробластах. При этом даларгин стимулировал синтез ДНК в фибробластах. Аппликация седатина на роговицу не оказывала влияния на синтез ДНК, в то время как даларгин в этих условиях оказывал стимулирующее влияние.

Даларгин является официнальным препаратом. Полученные экспериментальные данные послужили основой для применения его в клинической практике для протекции и адаптации слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта к действию повреждающих агентов (при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, при атрофическом гастрите и НПВП-гастропатиях, при болезни Крона, при гастроинтестинальной форме сальмонеллеза) [1, 3, 25, 36].

Известно, что и даларгин, и седатин обладают антистрессорной активностью, при этом даларгин оказывает релаксирующее влияние, а седатин повышает концентрацию внимания. Поэтому установленная нами способность седатина - потенциального фармакологического препарата - оказывать цитопротективные эффекты может быть использована в клинической практике у лиц, работающих с производственно-профессиональными рисками.

Универсальность АКМ-механизмов протективного эффекта седатина в фило- и онтогенезе подтверждается серией экспериментов, выполненных на рыбах осетровых пород [28, 33, 34]. Показано, что однократная обработка оплодотворенной икры седатином (инкубация с раствором пептида в концентрации 0,01 и 0,1 мг/л) позитивно влияет на ранние периоды развития осетра амурского Acipencer schrenki. Пептид ускорял выклев мальков и увеличивал его процент, повышал выживаемость особей и ускорял их развитие, достоверно увеличивая соматометрические показатели. Представляет интерес тот факт, что изменения биогенеза АКМ (повышение уровня антиоксидантной защиты) сохранились в тканях сердца и печени у 60-суточных мальков. Подобные изменения могут быть оценены как позитивные, поскольку способствуют повышению адаптируемости особей к негативным воздействиям внешней среды. Безаргининовый аналог, как и в прочих исследованиях, активности не проявлял.

Выводы

Таким образом, итогом проведенного исследования является расшифровка некоторых механизмов морфогенетической активности пептидов в условиях нормы и патологии, в различных популяциях клеток. Сформулирована концепция о наличии ряда универсальных механизмов реализации морфогенетической активности пептидов, связанных с биогенезом активных кислородных метаболитов, оксида азота в том числе. Разработанный комплексный подход к оценке механизмов действия регуляторных пептидов на клетки млекопитающих и рыб может быть использован при проведении экспериментальных работ в области биологии развития и в фармакологии. Установленный гастропротективный эффект седатина является обоснованием для его применения с целью профилактики повреждения слизистой оболочки желудка при использовании нестероидных противовоспалительных препаратов. Результаты исследования позволили существенно расширить показания для применения даларгина в клинической практике. Полученные данные определяют ряд направлений для дальнейшего исследования возможности управления процессами репаративной регенерации, в том числе для оценки роли пептидергической составляющей в регуляции клеточной дифференцировки и апоптоза.

Литература

1. 1. Алексеенко С.А., Тимошин С.С., Болоняева Н.А. и др. Влияние даларгина на репаративную способность слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта при различных гастроэнтерологических заболеваниях // Дальневост. мед. журнал.- 2010. - №3. - С. 15-18.
2. 2. Боровская Т.Ф., Курпас Е.Н., Козлов В.К. и др. Даларгин в лечении хронических воспалительных заболеваний легких: мат-лы Русско-японского мед. симп. Благовещенск, 2000. - С. 477-478.
3. 3. Болоняева Н.А., Исаенко Л.П., Флейшман М.Ю. и др. Применение даларгина для профилактики и лечения НПВП-гастропатий // Дальневост. мед. журнал. - 2005. №2. - С. 62-66.
4. 4. Гусева О.Е., Лебедько О.А., Тимошин С.С. Влияние синтетического аналога дерморфина на ДНК-синтетическую активность эпителиоцитов и гладких миоцитов трахеи новорожденных белых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии // Дальневост. мед. журнал. - 2009. - №1. - С. 95-97.
5. 5. Дейгин В.И. Разработка оригинальных пептидных лекарственных препаратов: ситуация в России и в мире. Парламентские слушания в Государственной Думе Российской Федерации. - Октябрь. 2009 г. - Режим доступа: // http://www.biorosinfo.ru/work/events/simpoziumykonferentsiisezdy-chtenija/68.
6. 6. Животова Е.Ю., Флейшман М.Ю., Лебедько О.А. и др. Влияние даларгина на процессы синтеза ДНК в слизистой оболочке желудка белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - №9. - С. 288-290.
7. 7. Животова Е.Ю., Болоняева Н.А., Сазонова Е.Н. и др. Роль аминокислоты аргинин в механизмах влияния даларгина на регенерацию слизистой оболочки желудка // Морфология. -2009. - Т. 136, №4. - С. 57b.
8. 8. Животова Е.Ю., Флейшман М.Ю., Сазонова Е.Н. и др. Гастропротективный эффект даларгина при гастропатии, вызванной приемом нестероидных противовоспалительных препаратов // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - Т. 147, №4. - С. 422-425.
9. 9. Крыжановская С.Ю., Гусева О.Е., Лебедько О.А. и др. Влияние аналогов дерморфина и лей-энкефалина на биогенез активных кислородных метаболитов в кардиореспираторной системе новорожденных белых крыс // Дальневост. мед. журнал. - 2006. - №3. - С. 89-91.
10. 10. Крыжановская С.Ю., Лебедько О.А., Сазонова Е.Н. и др. Влияние синтетических аналогов дерморфина на тканевой гомеостаз миокарда новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Т. 144, №10. - С. 413-415.
11. 11. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Влияние эндотелина-1 на синтез ДНК в эпителии и гладкомышечных клетках трахеи новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2000. - Т. 129, №3. - С. 294-296.
12. 12. Лебедько О.А., Тимошин С.С., Беспалова Н.Н. Влияние ангиотензина II на пролиферативную активность эпителиоцитов и гладкомышечных клеток трахеобронхиальной системы новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2000. - Т. 130, №7. - С. 28-30.
13. 13. Лебедько О.А., Тимошин С.С., Рубина А.Ю. Влияние пептидного морфогена гидры, его аналога и фрагментов на синтез ДНК в эпителии и гладкомышечных
14. 14. клетках трахеи новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2000. - Т. 129, №6. - С. 646-648.
15. 15. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Влияние лигандов опиоидных рецепторов на синтез ДНК в эпителиоцитах и гладких миоцитах трахеи новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2001. - Т. 131, №2. - С. 205-207.
16. 16. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Цыганков В.И. Влияние атриального натрийуретического пептида на синтез ДНК и NADPH-диафоразную активность в эпителиоцитах и гладких миоцитах трахеобронхиальной системы новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2002. - Т. 133, №1. - С. 34-37.
17. 17. Лебедько О.А., Тимошин С.С., Цыганков В.И. Влияние эндотелина-1 на процессы синтеза ДНК и NADPH-диафоразную активность эпителиоцитов и гладких миоцитов трахеобронхиальной системы новорожденных белых крыс в условиях повторного введения L-NAME // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 2002. - Т. 133, №3. - С. 282-285.
18. 18. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Влияние L-NAME на процессы синтеза ДНК и NADPH-диафоразную активность эпителиоцитов и гладких миоцитов респираторного тракта новорожденных белых крыс // Бюл. физиологии и патологии дыхания СО РАМН. - 2002. - №1. - С. 12-15.
19. 19. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Коррекция даларгином нарушений процессов синтеза ДНК и свободнорадикального окисления, индуцированных L-NAME, в органах дыхания новорожденных белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2002. - Т. 133, №5. - С. 501-503.
20. 20. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Влияние динорфина А(1-13) на процессы синтеза ДНК и свободнорадикального окисления в органах дыхания новорожденных белых крыс на фоне предварительного воздействия LNAME // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2003. - Т. 135, №3. - С. 226-229.
21. 21. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Атриальный натрийуретический пептид корригирует нарушения процессов синтеза ДНК и свободнорадикального окисления, индуцированных L-NAME, в органах дыхания новорожденных белых крыс // Бюл. физиологии и патологии дыхания СО РАМН.- 2005. - №11. - С. 72-74.
22. 22. Лебедько О.А., Тимошин С.С. Корригирующие эффекты регуляторных пептидов в системе органов дыхания на фоне повторной блокады синтеза оксида азота, индуцированной введением L-NAME (экспериментальное исследование) // Дальневост. мед. журнал. - 2006. №3. - С. 86-89.
23. 23. Лебедько О.А., Гусева О.Е., Тимошин С.С. Применение седатина для коррекции нарушений биогенеза активных кислородных метаболитов в легких и крови новорожденных крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии // Бюл. физиологии и патологии дыхания СО РАМН. - 2007. - Вып. 24. - С. 38-40.
24. 24. Лебедько О.А., Тимошин С.С., Гусева О.Е. и др. Влияние седатина на постгипоксические нарушения в кардиореспираторной системе новорожденных белых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии // Бюл. физиологии и патологии дыхания СО РАМН. - 2008. - Вып.
25. 25. - С. 11-13.
26. 26. Лебедько О.А., Гусева О.Е., Козлов В.К. Особенности биогенеза активных кислородных метаболитов у детей с хроническими бронхообструктивными заболеваниями легких на фоне бронхолегочной дисплазии // Новые медицинские технологии. Новое медицинское оборудование. - 2009. - №3. - С. 9-12.
27. 27. Ожегов Е.В., Алексеенко С.А., Лебедько О.А. и др. Применение даларгина в комплексной терапии болезни Крона // Дальневост. мед. журнал. - 2009. - № 2. - С. 11-13.
28. 28. Соколов А.В., Флейшман М.Ю., Сазонова Е.Н. Олигопептиды с опиоидной активностью и повышение эффективности искусственного воспроизводства амурских осетровых рыб // Вестник ДВО РАН. - 2007. - №6. - С. 116-122.
29. 29. Тимошин С.С., Сазонова Е.Н., Лебедько О.А. и др. Роль пептидного морфогена гидры в становлении гомеостаза белых крыс на раннем этапе постнатального онтогенеза // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1998. - Т. 126, №12. - С. 681-683.
30. 30. Тимошин С.С., Лебедько О.А. Влияние регуляторных пептидов на становление структурного гомеостаза трахеи белых крыс в раннем постнатальном периоде // Бюл. физиологии и патологии дыхания СО РАМН. - 2001. - №10. - С. 24-28.
31. 31. Тимошин С.С., Флейшман М.Ю., Лебедько О.А. и др. Морфогенетические эффекты аналогов дерморфина в различных клеточных популяциях (от экспериментов к практике) // Дальневост. мед. журнал. - 2010. - №3. - С. 70-73.
32. 32. Флейшман М.Ю., Животова Е.Ю., Лебедько О.А. и др. Анализ механизмов влияния аргининсодержащего аналога дерморфина на процессы пролиферации в слизистой оболочке желудка белых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Т. 144, №9. - С. 282-284.
33. 33. Флейшман М.Ю., Сазонова Е.Н., Лебедько О.А. и др. Влияние седатина - синтетического аналога дерморфина на развитие мальков осетра амурского // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Т. 144, №10. - С. 420-422.
34. 34. Флейшман М.Ю., Животова Е.Ю., Лебедько О.А. и др. Протективное действие аналога дерморфина седатина на индуцируемое индометацином повреждение слизистой оболочки желудка // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - Т. 147, №7. - С. 72-75.
35. 35. Флейшман М.Ю., Соколов А.В., Авласенко В.М. и др. Опыт применения опиоидных пептидов для повышения эффективности искусственного воспроизводства амурских осетровых рыб // Вопросы рыболовства. - 2009. - №3(39). - С. 564-574.
36. 36. Щепилова О.В., Томилка Г.С., Лебедько О.А. и др. Оценка оксидативного статуса эритроцитарных мембран у больных гепатитом А на фоне лечения даларгином // Дальневост. журнал инфекционной патологии. - 2008. №13. - С. 16-18.