2011 год № 2

Акушерство и гинекология

УДК 616.6.662 : 612.112.3

И.А. Храмова

Изменения лизосомных ферментов клеток системы макрофагов у женщин с ановуляторным менструальным циклом

Владивостокский государственный медицинский университет, 690950, пр.Острякова, 2, e-mail: vgmu.nayka@mail.ru, г. Владивосток

Резюме:

Описаны результаты исследования активности клеток системы макрофагов по изменению стабильности лизосомных мембран и секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин с овуляторным (40 чел.) и с ановуляторным менструальным циклом (16 чел.). Возраст женщин составлял 25-36 лет. Обследование проводилось на 13-15 дн. цикла. У женщин с ановуляцией на 13-15 дн. цикла, в период вероятного наступления овуляторной фазы, наблюдается выраженная лабилизация лизосомных мембран со значительным увеличением секреции и снижением синтеза лизоцима.

Ключевые слова:

лизосомные ферменты, макрофаги, менструальный цикл

I.A. Khramova

Macrophages system cells of lysosome enzymes changes in women with anovolutary menses

Vladivostoc medical state university, Vladivostok

Summary:

The article describes the results of the studies of activity of macrophages cells in accordance with stability of lysosome membranes and secretory-synthetic activity of blood monocytes and peritoneal macrophages in healthy women with ovulatory (40 persons) and anovulatory menses (16 persons). The mean age was 25-36. The examination was performed on 13-15 day of the cycle. In women with anovulation on 13015 day of the cycle, the period of probable ovulation phase occurrence there is a marked labialization of lysosome membrane with a signifi cant increase of secretion and decrease of lysocine synthesis.

Key words:

lysosome enzymes, macrophages, menstrual cycle

Введение

Овуляция зрелого фолликула происходит при пусковом действии возросшей концентрации лютеотропного гормона (ЛГ) на фоне оптимальных соотношений других половых гормонов и заключается в разрыве стенки фолликула и выходе яйцеклетки [1, 3, 6, 10]. Ановуляция возникает, прежде всего, при нарушении гормональных соотношений, частыми причинами ановуляции являются гиперпролактинемия и гиперэстрогенемия [8].

Разрыв стенки фолликула при овуляции происходит за счет тканевой реакции с истончением стенки ткани яичника в соответствующем месте, нарушения кровообращения, ферментативного воздействия, в частности, гиалуронидазы, протеаз, диастазы [2, 7]. В этом отношении изменение внеклеточной активности лизосомных ферментов при лабилизации лизосомных мембран клеток системы макрофагов может играть определенную роль в процессе овуляции. В частности, при активации макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов, происходит повышение выхода лизосомных ферментов из клеток. При этом секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток: при лабилизации состояния лизосомных мембран происходит повышение выхода ферментов, при стабилизации - снижение [12].

Цель исследования - изучение роли лизосомных ферментов перитонеальных макрофагов и их предшественников моноцитов крови в процессе овуляции у здоровых женщин с овуляторным и с ановуляторным менструальным циклом.

Материалы и методы

Были исследованы моноциты крови и перитонеальные макрофаги у 40 здоровых женщин с овуляторным (1 группа, контроль) менструальным циклом и 16 здоровых женщин с ановуляторным (2 группа) менструальным циклом. Возраст женщин составлял 25-36 лет. Обследование проводилось в период вероятного наступления овуляции, на 13-15 дн. цикла. Все исследования проведены с учетом информированного согласия женщин. Для диагностики овуляторных менструальных циклов применялись методы клинического обследования, включающие набор стандартных методов с дополнительным использованием фолликулометрии, тестов гормональной диагностики [5, 6] (ректальная температура, аргоризация шеечной слизи, кольпоцитология). Всем женщинам определялся уровень прогестерона во II фазу менструального цикла на 7 дн. от предполагаемой овуляции.

Кровь и суспензию перитонеальных клеток для исследования брали при первичном обращении женщин, до начала традиционного лечения в процессе их обследования. Моноциты крови выделяли на градиенте плотности фиколлверографина методом A. Boyum (1968) в описании [11] с последующим прикреплением к поверхности стекла. Для получения перитонеальных макрофагов осуществлялась пункция заднего свода влагалища женщины. Макрофаги выделяли общепринятым способом - прикреплением клеток из суспензии к стеклу. Определение стабильности лизосомных мембран (СЛМ) моноцитов и макрофагов по показателю стабильности (ПСЛМ) проводили путем культивирования выделенных клеток в культуральной среде (среда 199 с 0,5% стерильного L-глутамина и 2,5% смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56°С) в течение 12-15 ч при 37°С с последующим определением в надклеточной среде секретированного лизоцима (Lсекр.) в мкг/мл и после 46-кратного замораживания-оттаивания культивируемых клеток, общего лизоцима (Lобщ. - секретированный плюс внутриклеточный) в мкг/мл микрометодом [4], с расчетом ПСЛМ в процентах [10]. Повышение ПСЛМ выше контрольного уровня здоровых людей является критерием лабилизации лизосомных мембран клеток, снижение - стабилизации лизосомных мембран клеток.

Синтезированный лизоцим (Lсинт.) клеток системы макрофагов определяли в процессе выполнения метода ПСЛМ, путем оценки разницы Lобщ. до и после культивирования, выраженный в мкг/мл. Обработку полученных данных производили в соответствии с рекомендациями [9] с использованием пакета программ Statistica 5 на персональном компьютере (ПК) "Pentium IV" с расчетом средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической (m), вероятности различий (р).

Результаты и обсуждение

У женщин с ановуляторным менструальным циклом (13-15 дн.) отмечается более выраженный подъем ПСЛМ как макрофагов, так и их предшественников, моноцитов крови (р<0,05 в сравнении с показателями при овуляторном цикле), что свидетельствует о повышенной лабильности лизосомных мембран клеток системы макрофагов в этот период цикла (табл. 1). Как видно из табл. 2, отмечалось заметное повышение секреторной активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов в отношении лизосомного фермента лизоцима у женщин при ановуляции (р<0,05). Изучение синтеза лизоцима (Lсинт.) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами показало (табл. 3), что у женщин с ановуляторным менструальным циклом происходит статистически достоверное снижение уровня синтеза лизоцима по сравнению с овуляторным периодом.

Таблица 1. Показатели стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с овуляторным и ановуляторным циклами
Группа	Период менструального цикла	ПСЛМ моноцитов (%)		ПСЛМ макрофагов (%)
Группа	Период менструального цикла	М±m	Р*	М±m	Р*
1	13-15 дн. овуляторного цикла (контроль)	83,8±1,3	р<0,05	87,6±1,1	р<0,01
2	13-15 дн. ановуляторного цикла	88,4±1,0		97,7±1,9

Примечание: * - достоверность различия между 1 и 2 группами.

Таблица 2. Секреторная активность клеток моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с овуляторным и ановуляторным циклами
Группы	Период менструального цикла	L секр. Моноцитов (мкг/мл)		L секр. Макрофагов (мкг/мл)
Группы	Период менструального цикла	М±m	Р*	М±m	Р*
1	13-15 дн. овуляторного цикла (контроль)	0,73±0,030	р<0,01	0,87±0,020	р<0,01
2	13-15 дн. ановуляторного цикла	0,87±0,033		0,96±0,025

Примечание. * - достоверность различия между 1 и 2 группами.

Таблица 3. Уровень синтеза лизоцима (Lсинт.) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин с овуляторным и ановуляторным циклами
Группа	Период менструального цикла	Lсинт. Моноцитов (мкг/мл)		Lсинт. Макрофагов (мкг/мл)
Группа	Период менструального цикла	М±m	Р*	М±m	Р*
1	13-15 дн. овуля торного цикла (контроль)	0,46±0,015	p<0,01	0,67±0,02	p<0,01
2	13-15 дн. ановуляторного цикла	0,36±0,018		0,57±0,03

Примечание. * - достоверность различия между 1 и 2 группами.

Выводы

Таким образом, при ановуляции (13-15 дн. цикла) имеет место выраженная лабилизация лизосомных мембран со значительным увеличением секреции и снижением синтеза лизоцима. Ановуляция, как известно, является частой причиной эндокринного бесплодия [3, 8]. Повышение активности лизосомальных ферментов, выявленное нами у женщин с ановуляторным циклом, можно расценивать как фактор, который способствует разрыву стенки фолликула и белочной оболочки яичника. Однако отсутствие овуляций у пациенток данной группы, по-видимому, свидетельствует о недостаточной эффективности повышения активности ферментов для преодоления других факторов, действие которых имеет противоположную направленность, препятствует овуляции.

Литература

1. Айдагулова С.В., Непомнящих Ю.В., Галкина И.О. Роль патологии фолликулярной ткани яичников в развитии овариальной дисфункции // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2007. - Т. 144, №10. - С. 452-457.
2. Бачалдин С.Л. Морфометрические и гистохимические особенности яичников новорожденных в зависимости от причин смерти: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Владивосток, 1994.
3. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии [под ред. В.И. Кулакова, Б.В. Леонова, Л.Н. Кузьмичева]. - М.: МИА, 2005. - 592 с.
4. Мотавкина Н.С., Шаронов А.С., Ковалев Б.М. Микрометоды в иммунологии // Монография. - Владивосток: ДВГУ, 1987. - 184 с.
5. Назаренко Т.А., Дуринян Э.Р., Перминова С.Г. Современные подходы к диагностике и лечению бесплодия у женщин // Гинекология. - 2004. - Т.6, №6. - С. 323-325.
6. Назаренко Т.А., Смирнова А.А. Индукция моно- и суперовуляции: оценка овариального резерва, ультразвуковой и гормональный мониторинг // Патология репродукции. - 2004. - №1. - С. 36-41.
7. Никитин А.И., Кулаков В.И., Леонов Б.В. Некоторые вопросы фолликулогенеза, оплодотворения при проведении процедур вспомогательной репродукции // Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии. - М.: МИА, 2005. - С. 31-42.
8. Овсянникова Т.В. Эндокринное бесплодие у женщин при гиперпролактинемии // Гинекология. - 2004. Т.6, №3. - С. 121-123.
9. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение прикладных программ Statistica. М.: Медиа сфера, 2002. - 305 с.
10. Репина М.А., Корнилов Н.В. Триггер финального созревания фолликулов // Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии [под ред. В.И. Кулакова, Б.В. Леонова, Л.Н. Кузьмичева]. - М.: МИА, 2005. - С. 61-70.
11. Чередеев А.Н. Количественная и функциональная оценка Т- и В-систем иммунитета у человека // Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники. - М.: ВИНИТИ, 1976. - Т.4. - С. 124-160.
12. Шаронов А.С. Фагоциты, лизосомы, мембраны. Владивосток: Дальнаука, 2007. - 128 с.
13. Adams J.M., Tailor W.F., Crowley J.E., Hall J. Polycystic ovarian morphology with regular ovulatory cycles: insights into the pathophysiology of poly cystic ovarian syndrome // Clin. Endocrinol. Metab. - 2004. - Vol. 89, №9. - P. 4343-4350.
14. Dewailly D. Polycystic ovary syndrome // J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod. (Paris). - 2000. - Vol. 29, №8. - P. 805806.