2015 год № 3

Акушерство и гинекология

УДК 612.60575.2:613.99-07:618.3-06

Н.И. Фролова, Т.Е. Белокриницкая, Н.Н. Страмбовская

Молекулярно-генетические предикторы осложнений беременности у молодых здоровых женщин

Читинская государственная медицинская академия, 672090, ул. Горького, 39а, тел. 8-(3022)-32-00-85, e-mail: pochta@medacadem.chita.ru, г. Чита

Контактная информация: Н.И. Фролова, e-mail: taasyaа@mail.ru

Резюме:

Изучены частотные характеристики полиморфизма генов (FVL-169G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C, MTHFR-677C>T, MTHFR-1298A>C, MTRR-66A>G), ассоциированных с риском акушерских и перинатальных осложнений, у 130 молодых здоровых женщин, планирующих беременность. Генотипы FVL-1691АA и FII-20210АA не выявлены. Число пациенток-носителей генотипов MTHFR-677ТT (5,4 %) и MTHFR-1298СC (11,5 %) не отличалось от показателей в общей популяции. Частота генотипов AGTR1-1166СC (7,7 %), FVL-1691GA (0,8 %), FII-20210GA (1,5 %), NO3-894СС (10,0 %) была ниже, а MTRR-66GG регистрировался чаще, чем в популяции (31 % против 15-25 %). Заключение: преконцепционное исследование молекулярно-генетических предикторов тромбофилии, артериальной гипертензии и гипергомоцистеинемии должно проводиться избирательно, при наличии отягощенного индивидуального и/или семейного анамнеза.

Ключевые слова:

генетический полиморфизм, осложнения беременности, преконцепционный скрининг

N.I. Frolova, Т.E. Belokrinitskaya, N.N. Strambovskaya

Molecular genetic prediction of pregnancy complications in young healthy women

Chita State Medical Academy, Chita

Summary:

The frequency characteristics of gene polymorphisms (FVL-169G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C, MTHFR-677C>T, MTHFR-1298A>C, MTRR-66A>G) associated with the risk of obstetric and perinatal complications were studied. This examination was conducted in 130 planned-pregnancy healthy young women. Mutant homozygous with FVL-1691АA и FII-20210АA genotypes were not identified in those women. The number of MTHFR-677TТ (5 %) and MTHFR-1298CС (12 %) genotypes carries did not differ from those in the general population. The frequencies of the occurrence of the heterozygous FVL-1691GA (0,8 %) genotype; mutant genotypes FII-20210GA (1,5 %), AGTR1-1166СC (7,7 %), NO3-894СС (10,0 %), associated with the risk of pregnancy complications were very low in those women. The frequency of mutant genotype MTRR-66GG was higher in the women surveyed than in the general population (31 % vs 15-25 %). We concluded that selective thrombophilia, arterial hypertension and hyperhomocysteinemia gene screening based on prior personal and/or family history of arterial hypertension, pregnancy complications or venous thromboembolism was more cost-effective than a universal preconception screening in all planning pregnancy women.

Key words:

gene polymorphism, pregnancy complications, preconception screening

Введение

Выявление молекулярно-генетических предикторов заболеваний служит базисом для развития персонализированной (индивидуальной) медицины. В этом аспекте большой научно-практический интерес представляют исследования генетического полиморфизма. Метаанализ проспективных когортных исследований свидетельствует о наличии взаимосвязи между полиморфными вариантами генов фактора V Лейдена (FVL-1691G>A) и протромбина (FII-20210G>A) матери и такими осложнениями беременности, как невынашивание, задержка роста плода, преэклампсия/эклампсия и преждевременная отслойка плаценты [6, 7, 11, 13, 14]. Обнаружена взаимосвязь между мутантными аллелями полиморфизма генов ангиотензиногена AGTR1-1166A>C, и эндотелиальной синтазы окиси азота NO3-894G>C с возникновением преэклампсии [3, 5, 10].

Многочисленными исследованиями доказано, что полиморфизм генов метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR-677C>T и MTHFR-1298A>C) и редуктазы метионинсинтазы (MTRR-66A>G) ассоциирован с дефектами развития нервной трубки, сердечно-сосудистой системы плода; невынашиванием, плацентарной недостаточностью; задержкой развития и/или антенатальной гибелью плода; преэклампсией, преждевременной отслойкой нормально расположенной плаценты и рядом других акушерских и перинатальных проблем [1, 12, 13, 15].

В связи с этим, целью нашей работы явилось изучение распространенности заявленных молекулярно-генетических предикторов осложнений гестации у молодых здоровых жительниц Забайкалья, планирующих беременность.

Материалы и методы

На этапе преконцепционной подготовки было проведено генотипирование 130 здоровых коренных жительниц Забайкальского края в возрасте от 19 до 29 лет (средний возраст составил 24,6±3,8 года), которые не имели в прошлом беременностей, семейного или индивидуального анамнеза артериальной гипертензии, тромбозов и/или тромбоэмболий. Все пациентки дали добровольное информированное согласие на проведение генетического картирования и обработку полученных результатов.

Исследование генетического полиморфизма фактора V Лейдена (FVL-1691G>A), протромбина (FII-20210G>A), эндотелиальной синтазы оксида азота (NO3-894G>C), рецептора 1-го типа ангиотензиногена-2 (AGTR1-1166A>C), метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR-677C>T; MTHFR-1298A>C) и редуктазы метионинсинтазы (MTRR-66A>G) проведено на ДНК, полученной из лейкоцитов периферической крови ("Проба-РАПИД генетика", ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Москва). В качестве метода использована полимеразная цепная реакция с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени (Амплификатор "ДТ-96") с использованием комплектов реагентов "КардиоГенетика тромбофилия", "КардиоГенетика Гипертония", "Генетика метаболизма фолатов" (ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Москва) [8].

Качественные данные представлены в виде числа n и % (число пациенток - носителей данного аллеля и процент от их количества в группе исследуемых) или десятичной доли единицы (Р). Выявленные генотипы проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга. Межгрупповые различия по качественным бинарным признакам оценивали по критерию χ² с помощью программы Statistica 6.0 ("StatSoft"). Значения считали статистически значимыми при р≤0,05, при величине χ²>3,84.

Результаты и обсуждение

В ходе работы обнаружены все искомые аллельные варианты в гомо- и гетерозиготном состоянии, распределение генотипов которых соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (HWE, p>0,05). В когорте здоровых молодых женщин нами не обнаружено гомозиготное состояние генотипа по мутантному аллелю FVL-1691G>A и FII-20210G>A (популяционные показатели для женщин в Забайкалье - 2,7 % и 2,2 %, соответственно [2]). Частота FVL-1691GG и FVL-1691GA составила: 99,2 % (129/130) и 0,8 % (1/130) соответственно. Среди обследуемых 98,5 % (128/130) были гомозиготными (20210GG), а 1,5 % (2/130) гетерозиготными (20210GA) носителями полиморфизма FII-20210G>A (таблица). Таким образом, частота гетерозиготного носительства варианта FVL-1691GA 0,8 % и FII-20210GA 1,5 %, ассоциированных с риском тромбозов, в обследованной когорте пациенток была в 3 раза меньше, чем популяционные показатели в Забайкалье - 2,5 % и 4,5 %, соответственно (р<0,05) [2].

Таблица. Частота аллелей и генотипов изучаемого генетического полиморфизма у молодых женщин, планирующих беременность (n=130)
Исследуемые полиморфизмы	Частота генотипов, абс. (%)			Частота аллелей, Р
FVL-1691G>A	GG	GA	AA	G	A
FVL-1691G>A	129 (99,2)	1 (0,8)	0	0,996	0,004
FII-20210G>A	GG	GA	AA	G	A
FII-20210G>A	128 (98,5)	2 (1,5)	0	0,992	0,008
AGTR1-1166A>C	АА	АС	СС	А	С
AGTR1-1166A>C	93 (71,5)	27 (20,8)	10 (7,7)	0,819	0,181
NO3-894G>C	GG	GC	СС	G	С
NO3-894G>C	75 (57,7)	42 (32,3)	13 (10,0)	0,739	0,261
MTHFR-677С>Т	СС	СТ	TТ	С	Т
MTHFR-677С>Т	70 (53,8)	53 (40,8)	7 (5,4)	0,76	0,24
MTHFR-1298A>C	АА	АС	СС	А	С
MTHFR-1298A>C	60 (46,2)	55 (42,3)	15 (11,5)	0,68	0,32
MTRR-66A>G	AA	AG	GG	A	G
MTRR-66A>G	36 (27,7)	53 (40,8)	41 (31,5)	0,49	0,51

1166A-аллель гена рецептора 1-го типа ангиотензиногена-2 в гомо- либо гетерозиготном состоянии идентифицирован у 120 из 130 (92,3 %) пациенток. Частота встречаемости нормального генотипа AGTR1-1166АА составила 71,5 % (93/130), гетерозиготного генотипа AGTR1-1166AC - 20,8 % (27/130). Гомозиготных носительниц по мутантному аллелю AGTR1-1166СC, ассоциированному с артериальной гипертензией, выявлено лишь 7,7 % (10/130), что статистически значимо отличается от показателя в европейских популяциях 21,5 % (р<0,05) [9].

Активное участие окиси азота (NO) в регуляции сосудистого тонуса, кровотока и артериального давления позволяет рассматривать функционально-значимые полиморфизмы гена eNOS как возможные маркеры риска развития артериальной гипертензии, тяжелой преэклампсии, эклампсии [1, 5, 9]. Преконцепционный скрининг на носительство полиморфизма гена NO3-894G>C показал, что 90 % (117/130) молодых здоровых женщин имели нормальный гомозиготный (894GG) или гетерозиготный (894GС) генотип заявленного полиморфизма эндотелиальной синтазы окиси азота. Распространенность нормального генотипа 894GG составила 57,7 % (75/130), гетерозиготного генотипа 894GС - 32,3 % (42/130). Гомозиготных носительниц по мутантному аллелю 894СС, связанного с риском артериальной гипертензии, идентифицировано значительно меньше 10,0 % (13/130), чем в европеоидных популяциях (30-40 %, p<0,05) [1, 9].

Важным аспектом прогнозирования вероятности развития перинтальных и акушерских осложнений признано наличие генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушением метилирования ДНК вследствие дефицита ферментов фолатного цикла [1, 12]. Сопоставляя полученные нами результаты с данными современной популяционной генетики, следует заключить, что в целом частота встречаемости гомозиготных мутантных генотипов MTHFR-677ТТ и MTHFR-1298CС полиморфизма гена MTHFR (5,4 и 11,5 % соответственно) у здоровых молодых коренных жительниц Забайкальского края не имеет значимых отличий от соответствующих частот мировых общепопуляционных показателей [1, 9, 15]. Отличительной чертой распределения генотипов среди представительниц Забайкальского края является преобладание носительниц нормального генотипа MTHFR-677СC (53,8 %), в то время как доминирующим в популяции является MTHFR-677СТ (56,0 %) [1, 9].

Мутантный вариант генотипа MTRR-66GG в целевой исследуемой группе зарегистрирован в 31,5 %, что в 1,3-2,1 раза превышает популяционные показатели (15-25 %) [1, 9]. При этом сохраняется общая закономерность: гетерозиготный генотип MTRR-66AG является преобладающим (у жительниц Забайкалья - 40,8 %, в популяции - 40-50 %).

Отсутствие мутантных гомозиготных генотипов FVL-1691АA и FII-20210АA, меньшие, чем в популяции, показатели встречаемости гетерозиготных генотипов FVL-1691GA (0,8 %) и FII-20210GA (1,5 %), ассоциированных с осложнениями беременности; мутантных генотипов AGTR1-1166СC (7,7 %) и NO3-894СС (10,0 %), связанных с риском артериальной гипертензии, позволяют заключить, что преконцепционное обследование пациенток на молекулярно-генетические предикторы тромбофилии и артериальной гипертензии должны проводиться избирательно - при наличии индивидуального и/или семейного анамнеза артериальной гипертензии, преэклампсии, эклампсии и/или венозных тромбозов/тромбоэмболий.

Повышенная частота распространенности мутантного генотипа MTRR-66GG (31 %) не является основанием для рутинного скрининга здоровых женщин, планирующих беременность, - это нецелесообразно и экономически необосновано. Для снижения рисков аномалий развития плода и осложнений

гестации показано применение препаратов фолиевой кислоты, начиная с этапа преконцепционной подготовки и в течение I триместра гестации [4].

Литература

1. Баранов В.С. Генетический паспорт - основа индивидуальной и предикативной медицины. - СПб.: Н-Л, 2009. - 528 c.
2. Богданов И.Г. и др. Распространенность мутации FVL (Лейден) на территории Забайкалья // Дальневосточный медицинский журнал. - 2007. - № 1. - С. 33-34.
3. Глотов А.С. и др. Полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой системы и риск развития сосудистой патологии у беременных женщин с гестозом // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - № 3. - С. 61-68.
4. Приказ МЗ РФ № 572н от 12 ноября 2012 года "Порядок оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология (за исключение использования вспомогательных репродуктивных технологий"). - Режим доступа http://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_160715/ (12 февраля 2015 г.).
5. Benedetto C. Synergistic effect of renin-angiotensin system and nitric oxide synthase genes polymorphisms in pre-eclampsia // Acta Obstet. Gynecol. Scand. - 2007. -Vol. 86, № 6. - Р. 678-82.
6. Bradley L.A. Can Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing in women with recurrent pregnancy loss result in improved pregnancy outcomes?: Results from a targeted evidence-based review // Genet Med. - 2012. - № 14 (1). - Р. 39-50.
7. Helgadottir L.B. The association of inherited thrombophilia and intrauterine fetal death: a case-control study // Blood Coagul Fibrinolysis. - 2011. - № 22 (8). - Р. 651-656.
8. http://dna-technology.ru/instr-equ/instr_reagents/ (30 октября 2014).
9. http://www.snpedia.com/index.php/SNPedia (30 октября 2014).
10. Ku?mierska-Urban K. Selected polymorphisms of renin-angiotensin system in the pathology of hypertensive disorders of pregnancy // Ginekol. Pol. - 2013. - № 84 (3). - Р. 214-218.
11. Rodger M.A. The association of factor V Leiden and prothrombin gene mutation and placenta-mediated pregnancy complications: a systematic review and meta-analysis of prospective cohort studies // PLoS Med. - 2010. - № 7 (6).- Режим доступа: http://www.plosmedicine.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pmed.1000292 (30 октября 2014).
12. Seremak-Mrozikiewicz A. The significance of folate metabolism in complications of pregnant women // Ginekol. Pol. - 2013. - № 84 (5). - Р. 377-384.
13. Slezak R. The role of 1691G>A (Leiden) mutation in Factor V gene, 20210G>A in prothrombin gene and 677C>T in MTHFR gene in etiology of early pregnancy loss // Ginekol Pol. 2011 Jun;82(6):446-50. [Article in Polish].
14. Vavrinkova B. Thrombophilic mutation by women with serious pregnancy complications // Ceska Gynekol. - 2012. - № 77 (2). - Р. 171-4 [Article in Czech].
15. Zhang T. Genetic variants in the folate pathway and the risk of neural tube defects: a meta-analysis of the published literature // PLoS One. 2013. 8(4):e59570. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3617174/ (12 февраля 2015 г.).