2015 год № 3

Акушерство и гинекология

УДК 612.6.05:616.921.5-618.3

Д.А. Тарбаева, Т.Е. Белокриницкая

Полиморфизм генов HLA DRB1 у беременных с тяжелым течением гриппа A(H1N1)pdm2009

Читинская государственная медицинская академия, 672090, ул. Горького, 39а, тел. 8-(3022)-32-00-85, e-mail: pochta@medacadem.chita.ru, г. Чита

Контактная информация: Д.А. Тарбаева, e-mail: dolgorma35@mail.ru

Резюме:

Проведено HLA-генотипирование локуса DRB1 у 163 заболевших гриппом A (H1N1)pdm2009 беременных. Обнаружена протекторная роль в отношении гриппа A(H1N1)pdm2009 генотипов HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 (р 0,05). Полиморфизм HLA DRB1*07*15 ассоциирован с осложненным течением гриппа (ОР=3,4; 95 % ДИ 0,8-7,5). Генотип DRB1*16*16 отмечен только в одном случае с крайне тяжелым течением гриппа.

Ключевые слова:

полиморфизм HLA DRB1, тяжелый грипп A (H1N1)pdm2009, беременность

D.A. Tarbaeva, T.E. Belokrinitskaya

Polymorphism of HLA DRB1 genes in pregnant women with severe influenza A(H1N1)pdm2009

Chita State Medical Academy, Chita

Summary:

Frequency of HLA-DRB1 locus was studied in 163 cases of influenza A (H1N1) pdm2009 pregnant. Genotypes HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 showed a protective role from influenza AH1N1pdm2009 (р 0,05). Polymorphism HLA DRB1*07*15 was associated with severe complicated flu (H1N1)pdm09 (RR = 3,4; 95 % CI 0,8-7,5). Genotype DRB1*16*16 was observed only in one near miss case of influenza in pregnancy.

Key words:

polymorphism HLA DRB1, severe influenza A (H1N1) pdm2009, pregnancy

Введение

Значимость проблемы гриппа A (H1N1)2009 у беременных очень велика: как показала пандемия 2009 года и последующие ежегодные эпидемические вспышки заболевания, данная инфекция представляет серьезную опасность для матери и плода [1, 4, 5]. По данным официальной статистики в период эпидемии 2009-2010 гг. в Забайкальском крае переболело гриппом 27,9 % беременных, у 9,4 % из которых инфекционное заболевание осложнилось вирусно-бактериальными пневмониями; летальность беременных составила 0,12 % и была кратно выше, чем в общей популяции 0,05 % (рχ²=0,05) [1, 5].

Восприимчивость людей к инфекционным агентам обусловлена генетически, в этом аспекте большое значение придается одной из наиболее полиморфных генетических систем человека - генам главного комплекса гистосовместимости (HLA - Human Leucocyte Antigens). Ген DR локуса DRB1* насчитывает более 400 аллельных вариантов и именно ему отводится роль одного из основных генов иммунного ответа человека [2]. Общепризнано, что существуют HLA специфичности (аллели), обладающие положительной ассоциацией с заболеванием, и, напротив, выполняющие роль "протекторов".

Цель исследования - определение HLA маркеров тяжелого течения гриппа A(H1N1)pdm2009 у беременных.

Материалы и методы

Для реализации поставленной цели обследовано 163 женщины (основная группа), перенесших грипп А(H1N1)pdm09 во время беременности, из них 67 женщин перенесли грипп тяжелой степени, 66 - средней степени тяжести, 30 - легкой степени. В группу сравнения были включены путем случайного отбора 44 женщины, проживающие в г. Чите, которые в эпидемию 2009 года были беременными и не заболели гриппом А(H1N1)pdm09 и ОРВИ. Женщины обеих групп были сопоставимы по паритету и возрасту.

Молекулярно-генетическое типирование для выявления 14 групп аллелей гена DRB1 главного комплекса тканевой совместимости человека проведено на ДНК, полученной из периферической крови. В качестве метода исследования использована полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени (Амплификатор "ДТ-96", ООО "ДНК-Технология", Москва) с использованием комплекта реагентов для выделения ДНК ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА и ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА (ООО "НПО ДНК-Технология").

Статистический анализ выполнен в Центре БИОСТАТИСТИКА (руководитель В.П. Леонов). Для сравнения распределений частот генотипов и аллелей в двух группах использовался критерий χ² с поправкой Йетса. Об ассоциации аллелей или генотипов с предрасположенностью к изучаемой патологии судили по величине относительного риска заболевания (ОР). Границы 95 % доверительного интервала (ДИ) вычисляли методом B. Woolf. Значения уровня p<0,05 рассматривались как статистически значимые.

Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом Читинской государственной медицинской академии (протокол № 4 от 17.11.12 г.).

Результаты и обсуждение

При сравнительном анализе частот DRB1-специфичностей между заболевшими гриппом A(H1N1)2009 и здоровыми беременными женщинами, а также изучении полиморфизма в зависимости от степени перенесенной инфекции статистически значимых различий не выявлено. Среди заболевших пациенток отмечена лишь некоторая тенденция в сторону накопления аллелей DRB1 *04 (27,6 % против 20,5 % в контроле), DRB1*01 (23,3 vs 18,2 %), DRB1*03 (19 vs 13,6 %), DRB1*09 (6 vs 0 %) (табл. 1).

Таблица 1. HLA-фенотип у заболевших (по степени тяжести) и незаболевших гриппом беременных
HLA-фенотип	Контрольная группа (n=44)	Основная группа (n=163)	Основная группа по степени тяжести перенесенной инфекции
	Контрольная группа (n=44)	Основная группа (n=163)	легкое течение (n=30)	среднетяжелое течение (n=66)	тяжелое течение (n=67)
	абс. число (%), частота гена	абс. число (%), частота гена	абс. число (%), частота гена	абс. число (%), частота гена	абс. число (%), частота гена
01	8 (18,2 %) 0,09	38 (23,3 %) 0,12	10 (33,3 %) 0,17	16 (24,2 %) 0,12	12 (17,9 %) 0,09
03	6 (13,6 %) 0,07	31 (19,0%) 0,1	4(13,3 %) 0,07	16 (24,2 %) 0,12	11 (16,4 %) 0,08
04	9 (20,5 %) 0,10	45 (27,6 %) 0,14	6 (20,0 %) 0,1	18 (27,3 %) 0,14	21 (31,3 %) 0,16
06	0	1 (0,6 %) 0,00	1 (3,3 %) 0,02	0	0
07	18 (40,9 %) 0,20	45 (27,6 %) 0,14	5 (16,7 %) 0,09	17 (25,8 %) 0,13	23 (34,3 %) 0,17
08	4 (9,1 %) 0,05	10 (6,1 %) 0,03	3 (10,0 %) 0,05	3 (4,5 %) 0,02	4 (6,0 %) 0,03
09	0	6 (3,7 %) 0,02	1 (3,3 %) 0,02	1 (1,5 %) 0,01	4 (6,0 %) 0,03
10	0	6 (3,7 %) 0,02	2 (6,7 %) 0,04	3 (4,5 %) 0,02	1 (1,5 %) 0,01
11	10 (22,7 %) 0,11	36 (22,1 %) 0,11	9 (30,0 %) 0,15	16 (24,2 %) 0,12	11 (16,4 %) 0,08
12	2 (4,5 %) 0,02	7 (4,3 %) 0,02	1 (3,3 %) 0,02	3 (4,5 %) 0,02	3 (4,5 %) 0,02
13	15 (34,1 %) 0,17	42 (25,8 %) 0,13	10 (33,3 %) 0,17	15 (22,7 %) 0,11	17 (25,4 %) 0,13
14	2 (4,5 %) 0,02	11 (6,7 %) 0,03	2 (6,7 %) 0,04	4 (6,1 %) 0,03	5 (7,5 %) 0,04
15	9 (20,5 %) 0,11	39 (23,9 %) 0,12	4 (13,3 %) 0,07	19 (28,8 %) 0,14	16 (23,9 %) 0,12
16	5 (11,4 %) 0,06	9 (5,5 %) 0,03	2 (6,7 %) 0,04	1 (1,5 %) 0,01	6 (9,0 %) 0,04

Примечание. Сравнения частот HLA-фенотипов всех групп имеют значения р 0,05.

Генотип DRB1*01*04 идентифицирован только у 9,1 % здоровых резидентов при отсутствии такового среди беременных с гриппом (р=0,001). Кроме того протекторами выступили генотипы DRB1*07*08 (р=0,042; ОР=11,11), DRB1*11*13(р=0,032; ОР=3,7) (табл. 2). И, наоборот, генотипы *01*11, *07*15, *04*04, *04*13, *07*15 выявлены только среди лиц с гриппом при их отсутствии в группе сравнения.

Таблица 2. Частоты DRB1 генотипов HLA у заболевших и незаболевших гриппом беременных.
Генотип	Незаболевшие беременные (n=44)	Заболевшие гриппом беременные (n=163)	χ²	р	ОР (95 % ДИ)
Генотип	абс., (%)	абс., (%)	χ²	р	ОР (95 % ДИ)
0104	4 (9,1 %)	0	10,6	0,001*	-
0101	0	5 (3 %)	0,38	0,53	-
0107	2 (4,5 %)	3 (1,8 %)	0,2	0,6	-
0111	0	9 (5,5 %)	1,39	0,24	-
0113	2 (4,5 %)	3 (1,8 %)	0,23	0,62	-
0115	1 (2,2 %)	6 (3,7 %)	0,00	0,9	-
0304	0	4 (2,4 %)	0,19	0,67	-
0307	2 (4,5 %)	5 (3,1 %)	0,00	0,9	-
0404	0	5 (3,1 %)	0,3	0,5	-
0407	4 (9,1 %)	7 (4,3 %)	0,77	0,37	-
0413	0	9 (5,5 %)	1,38	0,24	-
0708	3 (6,8 %)	1 (0,6 %)	4,14	0,04*	11,11 (0,4;12,6)
0715	0	9 (5,5 %)	1,39	0,24	-
1113	6 (13,6 %)	6 (3,6 %)	4,59	0,03*	3,7 (0,6;6,5)
1115	2 (4,5 %)	2 (1,2 %)	0,64	0,42	-
1213	2 (4,5 %)	0	3,48	0,06	-
1315	1 (2,3 %)	6 (3,7 %)	0,00	0,9	-
1616	0	1 (0,6 %)	0,5	0,48	-

Примечание. ОР - относительный риск, 95 % ДИ - 95 % доверительный интервал; * - уровень значимости р 0,05.

В целом анализ распространенности генотипов в зависимости от степени тяжести перенесенной инфекции не обнаружил значимой разницы (табл. 3). Однако риск тяжелого течения гриппа при носительстве генотипа DRB1*07*15 увеличивался в 3,4 раза (ОР=3,4; 95 % ДИ 0,8-7,5). Генотип *16*16 зарегистрирован только у одной, едва не умершей, женщины с тяжелым течением гриппа.

Таблица 3. Частоты HLA DRB1 генотипов у заболевших гриппом беременных в зависимости от степени тяжести гриппа
Генотип	Степень тяжести гриппа			1-2		1-3		2-3
	легкая (n=30)	средняя (n=66)	тяжелая (n=67)	χ²	р	χ²	р	χ²	р
	абс. (%)	абс. (%)	абс. (%)	χ²	р	χ²	р	χ²	р
0101	1 (3,3 %)	1 (1,5 %)	3 (4,4 %)	0,04	0,53	0,08	1,0	0,21	0,64
0111	3 (10 %)	3 (4,5 %)	3 (4,4 %)	0,32	0,57	0,34	0,56	0,16	0,69
0304	0	2 (2,9 %)	2 (2,9 %)	0,04	1,0	0,03	1,0	0,24	0,62
0413	0	6 (9 %)	3 (4,4 %)	1,5	0,17	0,29	0,55	0,51	0,47
0708	0	0	1 (1,4 %)	-	-	0,16	1,0	0,00	0,94
0715	0	2 (2,9 %)	7 (10,4 %)	0,1	0,6	3,3	0,07	1,84	0,175
1113	1 (3,3 %)	3 (4,5 %)	2 (2,9 %)	0,07	1,0	0,2	1,0	0,00	0,98
1616	0	0	1 (1,4 %)	-	-	0,17	1,0	0,00	0,99

Примечание. 1-2 - сравнение частот генотипов HLA DRB1 при легком и среднетяжелом течении гриппа; 1-3 - сравнение частот генотипов HLA DRB1 при легком и тяжелом течении; 2-3 - сравнение частот генотипов HLA DRB1 при среднетяжелом и тяжелом течении гриппа.

Сложность выявления вариантов генов системы HLA, ассоциированных с благоприятным и неблагоприятным исходом различных инфекционных заболеваний, заключается в том, что гены HLA обладают высоким полиморфизмом и это далеко не единственный фактор, определяющий исход инфекционного процесса. Следует учитывать, что изобретение эффективных противоинфекционных препаратов усложняет поиск ассоциаций HLA и исхода заболевания [2].

В настоящее время опубликовано довольно много работ, посвященных поиску ассоциативных связей генов системы HLA c ОРВИ. Показано, что молекулярно-генетическими предикторами заболеваемости ОРВИ у рабочих нефтегазопромыслов являлись A10, В18, DR1, а маркерами резистентности - антигены HLA-А9, В7, В27, В40 [3]; фенотип HLA-B14 детерминирует повышенный риск возникновения повторных ларинготрахеитов при ОРВИ [6]. Индивидуумы с фенотипом HLA-B15 относительно резистентны к повторным заболеваниям. Тяжелое течение гриппа А чаще регистрировалось у юношей-носителей HLA-локусов -А10, -В8, -В14. Вместе с тем, среди пациентов с тяжелыми осложнениями гриппа в виде пневмонии со сливной формой инфильтрации HLA-B8 встречался в 2 раза реже, чем в целом в группе госпитализированных [7]. Тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС, атипичная пневмония), вызванный особым типом коронавирусов в 2002 году в Китае с летальностью до 4 %, был ассоциирован с HLA-B*4601[8], а генам HLA 1 класса локуса С - Сw1502 и 2 класса локуса DR-0301 присвоена протекторная роль [9].

Данные результаты носят предварительный характер и требуют дальнейших популяционных исследований. Некоторые ассоциативные связи генов главного комплекса гистосовместимости с гриппом, выявленные нами, объяснимы, с одной стороны, множественностью антигенных детерминант у возбудителя инфекции, с другой - полигенным контролем иммунного ответа, что ограничивает реализацию биологических эффектов, детерминированных различными генами системы HLA. Возможно, генотипы, обнаруженные только у заболевших гриппом беременных, такие как *01*11, *04*04, *04*13, *07*15 могут претендовать на статус молекулярно-генетических маркеров повышенной восприимчивости к вирусу гриппа, а генотипы DRB1*01*04, *07*08, *11*13, напротив, могут выступать самостоятельными протекторами. При этом детерминанты HLA*07*15, *16*16 ассоциированы с тяжелым течением гриппа A(H1N)pdm2009.

Выводы

Носительство генов HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 выполняет протекторную роль в отношении гриппа A(H1N1)pdm2009.
Присутствие в фенотипе у беременных женщин DRB1*07*15 ассоциировано с тяжелым течением гриппа.
Генотип DRB1*16*16 выявлен только в одном случае - у едва не умершей женщины с тяжелым гриппом A(H1N1)pdm2009.

Литература

1. Белокриницкая Т.Е. и др. Материнская смертность и едва не умершие женщины при гриппе A(H1N1) 2009 // Доктор Ру. - 2013. - № 1 (79). - С. 64-68.
2. Болдырева М.Н. HLA (класс II) и естественный отбор. "Функциональный" генотип, гипотеза преимущества "функциональной" гетерозиготности : автореф. дисс. … д-ра мед. наук / Болдырева Маргарита Николаевна. - М., 2007. - 47 с.
3. Ильинских Н.Н. и др. Маркеры системы HLA у больных респираторными инфекциями у рабочих нефтегазопромыслов севера Томской области // Актуальные проблемы современной науки : сборник науч. тр. - Томск, 2013. - С. 67-68.
4. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году: Государственный доклад. - М. : Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. - 456 с.
5. Родина Н.Н. и др. Клинико-эпидемиологическая характеристика гриппа A(H1N1)09 // Итоги эпидемии гриппа : материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. - Чита, 2010. - С. 165-167.
6. Савченко Н.А. Клинико-генетические аспекты острых стенозов гортани, трахеи и бронхов при острых респираторных вирусных инфекциях у детей : автореф. дисс. … канд. мед. наук / Савченко Нина Анатольевна. - СПб, 1994. - 15 с.
7. Цыбалова Л.М. Значение гетерогенности человеческой популяции по антигенам гистосовместимости и некоторых экологических факторов для эпидемического процесса при гриппе и ОРЗ : дисс. … д-ра мед. наук / Цыбалова Людмила Марковна. - СПб., 2003. - 329 с.
8. Association of HLA class I with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection // BMC Medical Genetics. - 2003. - Vol. 4. - P. 9.
9. Human-leukocyte antigen class I Cw 1502 and class II DR 0301 genotypes are associated with resistance to severe acute respiratory syndrome (SARS) infection // Viral Immunol. - 2011. - Vol. 24, № 2. - P. 421-426.