2015 год № 4

Резюме:

Ключевые слова:

Summary:

Key words:

Введение

В настоящее время установлено, что восприимчивость организма к инфекциям определяется патогенностью микроорганизмов, факторами окружающей среды и состоянием иммунной системы [13]. Защита на местном уровне после инфицирования осуществляется воспалительной реакцией, которая направлена на распознавание и уничтожение патогена и его компонентов. Т- и В-лимфоциты, осуществляющие адаптивный иммунный ответ, распознают патогены, используя высокоаффинные рецепторы [13]. Развитие адаптивного иммунитета обычно происходит достаточно медленно, так как предполагает активацию, пролиферацию лимфоцитов и синтез ими белков: цитокинов и иммуноглобулинов. Врожденный иммунитет характеризуется неотложными реакциями на патогены и играет основополагающую роль в развитии инфекции [6]. Он выступает первой линией защиты организма от патогенов, компоненты врожденного иммунитета не изменяются в течение всей жизни [4, 5, 23, 29, 39].

Обсуждение

Неспецифические защитные реакции, опосредуемые структурами врожденного иммунитета, реализуются через разнообразные клеточные элементы (макрофаги, эозинофилы, базофилы, естественные киллеры) и гуморальные факторы (естественные антитела, цитокины, система комплемента, интерфероны и др.) [4, 23, 39].

Основными функциями врожденного иммунитета являются распознавание патогенов и их уничтожение при помощи фагоцитоза или эндогенно синтезируемых антибактериальных пептидов. Если эти механизмы не приводят к утрате свойств патогена и не обеспечивают его элиминации, то врожденные механизмы защиты подготавливают патоген к взаимодействию с Т-лимфоцитами для последующего развития адаптивного иммунного ответа. Функционирование адаптивного иммунитета обеспечивают Т- и В-лимфоциты, а, механизмы врожденной защиты не имеют какой-либо дифференцированной системы клеток, а представляют собой разнообразные рецепторы, молекулы и их комплексы, которые конституционально присутствуют на разных клетках и имеют одинаковое функциональное предназначение [14]. Распознавание отдельно взятого антигена структурами врожденного иммунитета невозможно, по причине существования бесконечного множества антигенных структур. В связи с этим стратегией врожденных механизмов защиты является распознавание сходных фрагментов молекул, присутствующих у различных патогенов [31].

С целью объяснения механизма врожденной защиты C. Janeway в конце ХХ века сформулировал гипотезу о патогенассоциированных молекулярных "образах" (pathogen-associated molecular patterns - PAMPs), которые закодированы в геноме микроорганизмов и отсутствуют в геноме макроорганизмов. PAMPs представляют собой эволюционно консервативные молекулярные структуры, передающиеся у микроорганизмов из поколения в поколение [31, 47]. Наиболее изученными PAMPs являются липополисахариды бактериальной стенки, липопротеины, гликолипиды, флагеллин, липотейхоевые кислоты, маннаны, зимозан грибов, ДНК и РНК бактерий и вирусов [1, 7]. По результатам исследований последних лет доказано, что в качестве PAMPs могут выступать не только молекулярные структуры микроорганизмов, но и другие вещества, в том числе молекулярные структуры растений, экстракты домашней пыли, никель [44]. Кроме того, было доказано, что к PAMPs можно отнести и различные эндогенные соединения макроорганизма, высвобождающиеся при повреждении клеток (молекулярные паттерны, связанные с повреждением, - damage associated molecular patterns, DAMPs) [4]. В качестве последних могут выступать: белки теплового шока, фибронектин, дефензины, фибриноген и другие вещества [35, 45].

В настоящее время известно несколько семейств сигнальных PRRs, локализующихся на мембранах клетки или в ее цитозоле: TOLL-подобные рецепторы (TOLL-like receptors, TLRs), лектиновые рецепторы С-типа (C-type lectin receptors, CLRs), рецепторы - "мусорщики", или фагоцитарные рецепторы (scavenger receptors, SRs), NOD-подобные рецепторы (NOD-like receptors, NLRs), RIG-подобные рецепторы (RIG-I-like receptors, RLRs) [7, 13, 14].

Впервые TOLL-подобные рецепторы описал в 1985 году С. Nusslein - Volhard, анализируя нарушение процессов эмбриогенеза у мушек дрозофил. Он наблюдал личинку с недоразвитой вентральной частью туловища. Ген, вызывающий мутацию дорсовентральной полярности, получил название TOLL (нем. безумный, удивительный, поразительный) [31, 47]. Спустя 10 лет J. Hoffman установил, что дрозофилы, имеющие мутацию TOLL-гена, были высоко восприимчивы к грибковым инфекциям, на основании чего был сделан вывод, что TOLL-рецептор принимает участие в запуске иммунного ответа у взрослых мух. При последующих исследованиях R. Medzhitov и соавт. обнаружили первые гомоны ТОLL-рецептора дрозофилы у млекопитающих, который получил название TOLL-подобный рецептор (TOOL-like receptor) [31, 47]. TOOL-подобные рецепторы - класс клеточных рецепторов с одним трансмембранным фрагментом, которые распознают консервативные структуры микроорганизмов и активируют клеточный иммунный ответ, таким образом, играют ключевую роль во врождённом иммунитете [47].

TOLL-рецепторы у человека имеют сходную структуру и функцию [11]. В настоящее время идентифицированы 13 представителей семейства TLR, среди которых TLR 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 - выявляются у мышей и человека, TLR 10 - только у человека, TLR 11, 12, 13, только у мышей [2, 3, 22, 33, 36]. Все TLRs имеют сходное строение и представляют собой интегральные трансмембранные белки [7]. Поверхностная зона молекулы, ответственная за связывание лиганда, представлена N-концевой областью аминокислотной последовательности из 19-25 повторяющихся участков, обогащенных лейцином. Далее следует переходный участок, отвечающий за прикрепление рецептора к клеточной мембране, обогащенный цистеином. Внутренняя дистальная часть рецептора представлена TIR (Toll/IL-receptor) доменом, получившим свое название из-за одинакового строения этого участка у TLRs и у рецепторов цитокинов семейства IL-1 [7].

Часть TLR экспрессируется на клеточной мембране (TLR 1, 2, 4, 5, 6, 10) [33, 34], другие рецепторы (TLR 3, 7, 8, 9) локализуются во внутриклеточных мембранных компартментах (эндоплазматическом ретикуломе, эндосомах, лизосомах, эндолизосомах) [29, 34, 36, 43]. Каждый конкретный TLR играет важную роль в быстром распознавании специфических микробных компонентов, включая бактерии, грибы, вирусы и некоторые простейшие.

В последние годы получены данные о том, что, кроме клеток врожденного иммунитета - макрофагов, нейтрофилов [42], эозинофилов [50], базофилов [42], тучных клеток [46], TLRs присутствуют на αβ - и γδ - Т-лимфоцитах [24], а также на В-лимфоцитах [48].

Лигандами TOLL-подобных рецепторов могут выступать как экзогенные, так и эндогенные вещества. Экзогенными лигандами TLR являются PAMPs инфекционных агентов, эндогенными - молекулярные структуры, образующиеся при повреждении клеток, и аллармины (амфотерин, белки теплового шока, мочевая кислота и др.) [27, 29, 38].

Рецепторы, локализованные на мембранах внутриклеточных органелл, распознают молекулы ядерных структур микроорганизмов, но могут быть активированы и поврежденными молекулярными структурами собственного организма [30, 41]. Неактивированные TLRs находятся на мембране клеток в мономерном состоянии (состоянии покоя). После распознавания молекулярных "образов" патогенов TLRs активируют каскад реакций передачи сигнала в ядро клетки: при связывании с лигандом рецептор подвергается димеризации, сопровождающейся изменением конформации TIR-домена, который связывается с адапторной молекулой MyD88 (myeloid differentiation protein 88), необходимой для привлечения киназ семейства IRAK (IL-1 receptor associated kinase). После активации IRAK взаимодействует с внутриклеточным фактором TRAF6 (TNF receptor associated factor 6), в результате чего происходит высвобождение ядерного фактора каппа-В (NF- B) и транслокация его в ядро клетки. Связываясь с промоторными участками генов, ядерный фактор активирует синтез провоспалительных цитокинов, молекул адгезии, костимулирующих молекул с последующей активацией структур адаптивного иммунитета [18, 31, 40, 49]. Возможен также механизм MyD88-независимой передачи активационных сигналов от TLRs. Его отличием является то, что TIR-домен взаимодействует с адапторной молекулой TRIF (TIRdomain containing adaptor inducing IFNβ ) с последующей активацией внутриклеточного фактора IRF3 (interferon regulatory factor 3), индуцирующего экспрессию генов интерферонов α и β (IFNα и IFNβ ), являющихся важнейшими молекулами для дифференцировки Т-лимфоцитов [7].

Экспрессию TLR на поверхности клеток можно определит с помощью метода иммунофлуоресценции. Суть метода заключается в том, что используются меченные флуоресцентными красителями моноклональные антитела (МКАТ) против CD-маркеров данного типа клеток одновременно с меченными другим флуорохромом МКАТ к изучаемому TLR (метод "двойной метки") [5].

Следующим методом определения TLR является проточная лазерная цитометрия. Ядросодержащие клетки периферической крови выделяют путем осаждения эритроцитов 3 % раствором желатина. Уровень экспрессии мРНК генов TLR обычно определяют методом ПЦР в режиме "реального времени" (РВ), совмещенной с обратной транскрипцией с использованием специфических праймеров [12].

В настоящее время с помощью данных методов были проведены десятки исследований в области изучения TOOL-подобных рецепторов при различных заболеваниях человека.

Учитывая важнейшую роль TLR в реализации врожденного иммунного ответа можно предположить, что дефекты этих рецепторов, на уровне различных компонентов, участвующих в передаче сигнала, а так же факторов регулирующих их функцию могут способствовать развитию инфекционных и воспалительных заболеваний.

ТOLL-рецепторы являются первыми сигнальными молекулами, распознающими лиганды микроорганизмов и координирующими иммунный ответ слизистой оболочки женских половых путей. TLR экспрессируется маточными натуральными киллерами, эндотелиоцитами, гладкомышечными клетками шейки матки и миометрия [25, 26].

Последние исследования доказали, что экспрессия ТOLL-подобных рецепторов зависит также от фазы менструального цикла, однако данные исследований противоречивы. Так, Hirata, et al. (2007) предполагают, что экспрессия мРНК TLR 2-4 и TLR 9 выше в перименструальный период [25, 26], в то время как Aflatoonian, et al. (2007) выявили пиковую экспрессию мРНК TLR 2-6, TLR 9 и TLR10 в секреторную фазу цикла [16].

Таким образом, необходимы дальнейшие исследования, которые позволят установить роль системы сигнальных рецепторов в поддержании нормальной микрофлоры женских половых путей и восприимчивости к заболеваниям, передающимся половым путем.

Роль и функция TLRs в коже человека стала предметом изучения сравнительно недавно. В зарубежной литературе приводятся немногочисленные сведения о наличии различных TLRs на кератиноцитах различных слоев эпидермиса здоровых лиц [20, 28]. По данным B. Baker и соавт., экспрессируемые на клетках эпидермиса TLRs могут претерпевать изменения по мере продвижения кератиноцитов от базального слоя эпидермиса к роговому [19]. В исследованиях M. Mempel и соавт. показано, что культура первичных кератиноцитов здорового человека вырабатывает TLR1, TLR2, TLR3, TLR5 и TLR9. В то же время TLR4, TLR6, TLR7 и TLR8 в этой же культуре не были обнаружены [32]. В частности, в исследованиях S. Akira было установлено, что супернатантные TLR-стимулированные кератиноциты вызвали созревание дендритных клеток [18]. Полученные данные свидетельствуют о том, что TLRs играют важную роль в патогенезе заболеваний кожи, как инфекционной этиологии, так и неинфекционного происхождения.

Бронхиальная астма (БА) - гетерогенное заболевание. БА прогрессирует за счет персистенции воспаления и/или нарушения репарационных механизмов. Важную роль в этих процессах играют клетки систем врожденного и приобретенного иммунитета [17].

TLR имеются на лейкоцитах, включая Т- и В-лимфоциты, клетках эпителия и эндотелия, фибробластах, мышечных и нервных клетках. Активация подобных рецепторов приводит к продукции цитокинов, развитию воспаления и аллергии [17, 21].

Установлено значение TOLL-рецепторов, гемопоэтических стволовых клеток в патогенезе бронхиальной астмы. Эти данные могут быть использованы в диагностике и лечении бронхиальной астмы [17, 21].

В доступной литературе приводится мало сведений о роли TOLL-подобных рецепторов в патогенезе туберкулеза. Некоторые авторы упоминают TOLL-подобные рецепторы в развитии вторичной иммунологической недостаточности, но непосредственно не указано, исследована их роль или нет.

Взаимодействие структурных компонентов MБТ с TOLL-подобными рецепторами АРС (TLR-2, TLR-4) приводит к инициации в клетках MyD88-зависимого пути активации, включающего в себя серию каскадных реакций, приводящих к транскрипции генов, кодирующих провоспалительные цитокины и хемокины (IL-1β , IL-12β , IL-18, IL-27 и др.), а также к экспрессии на АРС молекул главного комплекса гистосовместимости MHC II и костимулирующих молекул CD80/CD86, абсолютно необходимых для презентации антигена и передачи антигенного импульса CD4 - T-лимфоцитам через Т-клеточный рецептор [4, 14].

MБТ обладают иммуномодулирующим свойством, приводящим к иммунной гипо- и анергии которым является индуцированная возбудителем дезорганизация хромосомного аппарата иммунокомпетентных клеток.

Апоптоз активированных в условиях туберкулезной инфекции Т-клеток позволяет элиминировать "отработавшие" их клоны, поддерживая тем самым клеточный гомеостаз, а с другой - формирует иммунную гиперергию, что может способствовать прогрессированию вторичной иммунологической недостаточности [1]. Апоптоз макрофагов, содержащих MБТ, предотвращает диссеминацию бактерий и является важнейшим защитным механизмом при микобактериальной инфекции [9, 37]. Данные проявления апоптотических процессов в иммунокомпетентных клетках можно рассматривать как один из способов стратегии "саботажа", применяемой MБТ, определяющей жизнеспособность фагоцитирующих клеток (являющихся резервуаром микобактериальной инфекции) и гибель Т-клеток-эффекторов (способствующих уничтожению патогена).

Следовательно, в процессе эволюции MБТ сформировали ряд свойств, позволяющих модулировать реакции клеточного иммунитета и программу гибели иммунокомпетентных клеток в соответствии с собственной стратегией выживания, обусловливая тем самым формирование иммунопатологических реакций. Исходя из этого, в настоящий момент актуален поиск точечных мутаций генов TLR, которые помогут спрогнозировать риск заболевания, исход туберкулеза и подобрать адекватную схему лечения.

Таким образом, в современной литературе широко представлены сведения о TOLL-подобных рецепторах. Большое количество исследований подтверждают важную роль TLR в патогенезе различных заболеваний человека - в первичных иммунодефицитах, инфекциях, аллергопатиях, аутоиммунных заболеваниях и многих других патологических состояниях [5, 8, 10, 15]. Учитывая всё выше сказанное в будущем перспективны исследования основанные на получении полной информации о функционировании системы TLR. Данные исследования помогут уточнить дефекты в системе врожденного иммунитета и провести комплексную их оценку.

Литература

1. 1. Быкова В.П. Иммунный барьер слизистых оболочек в современном прочтении: Клиническая лекция // Рос. оторинол. - 2009. - № 1. - С. 40-42.
2. 2. Ганковская О.А. Взаимодействие вирусов и TOLL-подобных рецепторов // Журнал микробиол. эпидемиол. иммунобиол. - 2010. - № 2. - С. 101-105.
3. 3. Захарова М.В. Цитокины в противотуберкулезном иммунитете // Вестник РУДН, серия Медицина. - 2009. - № 4. - С. 297-300.
4. 4. Кетлинский С.А. Цитокины. - СПб.: Фолиант, 2008. - 552 с.
5. 5. Ковальчук Л.В. и др. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке TOLL-подобных рецепторов человека // Иммунология. - 2008. - Т. 29, № 4. - С. 223-227.
6. 6. Кокряков В.Н. Очерки о врожденном иммунитете // Наука. - 2006. - № 261. - С. 273.
7. 7. Лебедев К.А. Иммунология образраспознающих рецепторов (интегральная иммунология). - М.: Книжный дом "ЛИБРОКОМ", 2009. - 256 с.
8. 8. Петрова Е.А. Клиническая характеристика и прогнозирование течения вульгарного псориаза у пациентов с полиморфизмом генов TOLL-рецепторов 4 и 9 типов // About Issues Search Rules. - 2013. - № 9. - С. 435-439.
9. 9. Пичугин А.В. Апоптоз клеток иммунной системы при туберкулезной инфекции // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2005. - № 12. - С. 3-7.
10. 10. Роль TOLL-подобного рецептора 7-го типа в развитии истинной анколитической пузырчатки // Цитокины и воспаление. - 2012. - Т. 12, № 4. - С. 7-14.
11. 11. Свитич О.А. Ассоциация полиморфных маркеров, локализованных в 5 - нетранслируемой области гена β -дефексина DEFB1c гипертрофией аденоидных вегетаций // Вестник РГДУ. - 2011. - № 3. - С. 23-25.
12. 12. Связь уровней мРНК TLR2 и TLR4 с изменениями иммуноглобулинового профиля урогенитального тракта при урогенитальном хламидиозе у женщин // Иммунология. - 2009 - Т. 30, № 3 - С. 165-170.
13. 13. Симбирцев А.С. TOLL-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета // Иммунология. - 2005. - № 6. - С. 68-77.
14. 14. Хаитов Р.М. и др. Роль паттернраспознающих рецепторов во врожденном и адаптивном иммунитете // Иммунология. - 2009. - № 1. - С. 66-76.
15. 15. Ярилин А.А. Иммунология. - М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2010. - 562 с.
16. 16. Aflatoonian R. Menstrual cycledependent changes in TLR in endometrium // Human Reprod. - 2007. - 22. - P. 586-593.
17. 17. Agarwal S., Rao A. Modulation of chromatin structure regulates cytokine gene expression during T cell differentiation // Immunity. - 1998. - № 9. - Р. 765-775.
18. 18. Akira A., Takeda K. Toll-like receptor signaling // Nat. Rev. Immun. - 2004. - № 4. - P. 499-511.
19. 19. Baker B.S. Normal keratinocytes express Toll-like receptors (TLRs) 1, 2 and 5: Modulation of TLR expression in chronic plaque psoriasis // Br. J. Dermatol. - 2003. - № 148. - P. 670-679.
20. 20. Begon E. Expression, subcellular localization and cytokinic modulation of Toll-like receptors (TLRs) in normal human keratinocytes: TLR2 up-regulation in psoriatic skin // Eur. J. Dermatol. - 2007. - № 17 (6). - P. 497-506.
21. 21. Boasen J. House dust extracts elicit Toll-like receptor-dependent dendritic cell responses // Clin. Immunol. - 2005. - Vol. 116. - P. 185-191.
22. 22. Brightbill H.D. Host defense mechanisms triggered by microbial lipoproteins through toll-like receptor // Science. - 1999. - Vol. 285, № 5428. - P. 732-736.
23. 23. Cario E. Toll-like receptors in inflammatory bovei diseases: a decade later / E. Cario // Inflamm. Bowei Dis. - 2010. - Vol. 16. - № 9. - Р. 1583-1597.
24. 24. Expression and Funktion of innate Pattent Recognition Receptors in T and B cells // Endoc. end Metab. Agents in Med. Chem. - 2010. - Vol. 10. - P. 11-20.
25. 25. Fazeli A. Characterization of Toll-like receptors in the female reproductive tract in humans / A. Fazeli, C. Bruce, D.O. Anumba // Human Reproduction. - 2005. - Vol. 20 (5). - P. 1372-1378.
26. 26. Hirata T. Expression of TLR 2, 3, 4 and 9 genes in the human endometrium during the menstrual cycle // J. Reprod. Immunol. - 2007. - № 74. - P. 53-60.
27. 27. Immunogenic cell death, DAMPs and anticancer therapeutics: an emerging amal gamation / A.D. Gard [et al.] // Biochim. Biophys. Acta. - 2010. - Vol. 1805, № 1 - Р. 53-71.
28. 28. James E. The role of toll-like receptors in the pathogenesis and treatment of dermatological disease // J. Invest. Dermatol. - 2005. - Vol. 1. - P. 1-8.
29. 29. Kawai T. The role of pattern - recognition receptors in innate immunity: update on Toll-like receptors/ T. Kawai, S.Akira // Nat. Immunol. - 2010. - Vol. 11, № 5. - P. 373-384.
30. 30. Marshak-Rothstein A. Toll-like receptors in systemic autoimmune disease // Nat. Rev. Immunol. - 2006. - № 6. - P. 823-835.
31. 31. Medzhitov R. TOLL-like receptors and innate immunity // Nat. Rev. Immunol. - 2001. - P. 135-145.
32. 32. Mempel M. TOLL-like receptor expression in human keratinocytes: Nuclear factor kappa B controlled gene activation by Staphylococcus aureus is toll-like receptor 2 but not toll-like receptor 4 or platelet activating factor receptor dependent // J. Invest. Dermatol. - 2003. - Vol. 121. - P. 1389-1396.
33. 33. Miller L.S. TOLL-like receptors in skin // Adv. Dermatol. - 2008. - Vol. 24. - P. 71-87.
34. 34. Netea M.G. Genetic variation in TOLL-like receptors and disease susceptibility // Nat. Immunol. - 2012. - Vol. 13, № 6. - P. 535-542.
35. 35. Ohashi K. Cutting edge: heat shock protein 60 is a putative endogenous ligand of the TOLL-like receptor 4 complex // J. Immun. - 2000. - Vol. 164. - P. 558-561.
36. 36. O'Nail L.A. TOLL-like receptorsin inflammation // Basel: Birkhauser Verlag. - 2005. - 244 p.
37. 37. O'Sullivan M.P. A caspaseindependent pathway mediates macrophage cell death in response to Mycobacterium tuberculosis infection // Infect. Immun. - 2007. - Vol. 75, № 4. - P. 1984-1993.
38. 38. Piccinini A.M. DAMPening inflammation by modulating TLR signalling // Mediatorsinflamm. - 2010. - Vol. 10. - Р. 11-55.
39. 39. Pradhan V.D. TOLL-like receptors in autoimmunity withspecial reference to systemic lupus erythematosus // Indian J. Hum. Genet. - 2012. - Vol. 18, № 2. - P. 155-160.
40. 40. Renn C.N. TLR activation of langerhans cell-like dendritic cells triggers an antiviral immune response // J. of Immunol. - 2006. - Vol. 177 (1). - P. 298-305.
41. 41. Rifkin I.R. Toll-like receptors, endogenous ligands, and systemic autoimmune disease // Immunol. Rev. - 2005. - Vol. 204. - P. 27-42.
42. 42. Sabroe I. Toll-like receptor (TLR2) and TLR4 in human peripheral blood granulocytes: a critical role for monocytes in leukocyte lipipolysaccharide responses // J Immun. - 2002. - Vol. 168. - P. 4701-4710.
43. 43. Sandor F. TOLL-like receptors. III. Biological significance and impactor human medicine // Folia Biol. (Praha). - 2005. - Vol. 51, № 6. - P. 198-203.
44. 44. Schmidt M. Crucial role for human Toll-like receptor 4 in the development of contact allergy to nickel // Nature Immunol. - 2010. - Vol. 11. - P. 814-819.
45. 45. Smiley S.T. Fibrinogen stimulates macrophage chemokine secretion through TOLL-like receptor 4 // J. Immun. - 2001. - Vol. 167. - 194 p.
46. 46. Supajatura V. Protective roles of mast cells against enterobacterial infection are mediated by toll-like receptor 4 // J. Immun. - 2001. - № 167. - 56 p.
47. 47. Takeda K. TOLL-like receptors // Annu Rev. Immunol. - 2003. - Vol. 21. - Р. 335-376.
48. 48. Treml L.S. TLR stimulation modifies BLyS receptor expression in follicular and marginal zone B cells // J. Immun. - 2007. - Vol. 178. - Р. 7531-7539 p.
49. 49. Valins W. The Expression of Toll-like Receptors in Dermatological Diseases and the Therapeutic Effect of Current and Newer Topical Toll-like Receptor Modulators // J. Clin. Aesthet. Dermatol. - 2010. - Vol. 3 (9). - P. 20-29.
50. 50. Wong C.K. Intracellular signaling mechanisms regulating toll-like receptor-mediated activation of eosinophils // Cell. Mol. r Biol. - 2007. - Vol. 37. - P. 85-96.