2016 год № 2

Фармакология и фармация

УДК 615.077

А.А. Костина¹, Э.Ф. Степанова², Н.В. Стрельникова¹, ³

Микробиологическая активность консерванта liquar optima в составе мазей с экстрактом Левзеи сафлоровидной

¹Дальневосточный государственный медицинский университет, 680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел. 8-(4212)-76-13-96, e-mail: nauka@mail.fesmu.ru, г. Хабаровск;
²Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал Волгоградского государственного медицинского университета, 357532, пр. Калинина, 11, тел. 8-(8793)-32-44-74, e-mail: v.l.adzhienko@pmedpharm.ru, г. Пятигорск-32;
³Краевая клиническая больница № 1 имени проф. С.И. Сергеева, 680009, ул. Краснодарская, 9, тел. 8-(4212)-39-05-78, e-mail: kkb1@dvmc.khv.ru, г. Хабаровск

Контактная информация: А.А. Костина, e-mail: anna-kostina-88@mail.ru

Резюме:

Исследованы наружные косметические формы, полученные на основе суммарного спиртово-маслянного извлечения из корневищ с корнями Левзеи сафлоровидной, включая анализ микробиологической активности выбранного консерванта. Исследования проводили в условиях бактериологической лаборатории многопрофильного стационара, используя 11 чистых культур клинически значимых условно-патогенных микроорганизмов и 11 музейных штаммов АТСС. Анализировали три варианта состава мазей, различающихся наличием действующих веществ. Работу проводили согласно стандартным методикам, культуры получали из клинического материала на соответствующих искусственных питательных средах и фиксировали размер зон диффузии мази, в которых имелась задержка роста исследуемых микроорганизмов. В результате, нами получены удовлетворительные результаты, доказывающие достаточную эффективность выбранной композиции против широкого спектра грибов, грамположительных кокков и грамотрицательных палочек.

Ключевые слова:

Левзея сафлоровидная, микробиологическая активность, консервант, мазь, экстракт

A.A. Kostina¹, E.F. Stepanova², N.V. Strelnikova^1,3

Microbiological activity of preservative in gels with an extract of Rhaponticum carthamoides

¹Far Eastern State Medical University (FESMU), Khabarovsk;
²Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute - a branch of Volgograd State Medical University, Pyatigorsk-32;
³Regional Clinical Hospital № 1 named prof. S. I. Sergeev, Khabarovsk

Summary:

The authors analyzed exterior cosmetic form, derived from an alcohol-oil extraction from rhizomes and roots of Rhaponticum carthamoides, and studied the microbiological activity of the selected preservative. The studies were carried out in a multidisciplinary hospital bacteriological laboratory using pure cultures of 11 clinically important opportunistic pathogens, and 11 strains ATCC of the museum. We analyzed three options for the composition of ointments, the presence of different active ingredients. The work was performed according to standard procedures, culture obtained from clinical material on the respective artificial media and fixed size of diffusion zones ointment, which had growth retardation of the studied microorganisms. As a result, we have obtained satisfactory results proving the effectiveness of the selected composition being effective against a broad spectrum of fungi, gram-positive cocci and gram-negative bacilli.

Key words:

Rhaponticum carthamoides, preservative, microbiological research, ointment, dry extract

Введение

Левзея сафлоровидная является эндемичным растением Западной Сибири, однако многолетний опыт культивирования этого растения позволяет широко использовать его корни и корневища [5]. По свойствам это лекарственное растительное сырье близко к представителям семейства аралиевых [4], что определяет перспективы его использования.

Получен полифракционный спиртовый экстракт левзеи сафлоровидной, а также масляный экстракт с использованием Твина 80 [3]. После чего они были введены в мазь на основе аэросила, ранее проведенные исследования показывают достаточную степень высвобождения активного вещества, которая позволяет провести анализ методом лунок [2]. В качестве консерванта выбран жирорастворимый Liquar Optima производства США.

Целью данной работы было исследование микробиологической активности консерванта Liquar Optima в составе мазей.

Материалы и методы

Определение проведено диско-диффузным методом в модификации для исследования мягких лекарственных форм [1] с использованием 11 чистых культур микроорганизмов: дрожжеподобных грибов трёх видов - Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, грамположительных кокков - Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, грамотрицательных энтеробактерий - Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Escherichia coli и Escherichia coli PDR(резистентность ко всем видам антибиотиков), а также неферментирующих бактерий синегнойной палочки Pseudomonas aeruginosa. Для проведения эксперимента брали клинические штаммы и штаммы, присланные ФСВОК, которые прошли стандартные испытания и штаммы из коллекции АТСС. Так как использовались активные, вирулентные клинически значимые культуры, рост всех культур регистрировался после культивирования в термостате через 24 часа, включая дрожжеподобные грибы рода Candida, что позволило получать удовлетворительный результат.

Исследованы три мазевые композиции на основе масляного извлечения из левзеи сафлоровидной и аэросила следующего состава (табл. 1). Предварительно проведены испытания на стерильность мазевых композиций с использованием сред Сабуро, тиогликолиевой, кровяного агара, и выявлено, что испытуемые образцы мазей стерильны.

Таблица 1. Составы модельных мазей
Номер состава	Состав мазей	Процентное соотношение компонентов
Состав № 1 (контроль)	Экстракта левзеи сафлоровидной суммарного сухого Экстракта левзеи масляного Аэросил	2,5 % 88,7 % 8,8 %
Состав № 2	Экстракта левзеи сафлоровидной суммарного сухого Экстракта левзеи масляного Аэросил Консервант Liquar Optima (производство США)	2,5 % 87,7 % 8,8 % 1 %
Состав № 3	Масла подсолнечного Аэросил Консервант Liquar Optima (производство США)	87,7 % 11,3 % 1 %

Масло подсолнечное рафинированное, предварительно стерилизованное, использовано при получении масляного извлечения из корней с корневищами Левзеи сафлоровидной [3], поэтому оно было избранно компонентом основы в составе № 3. Количество аэросила было в этом случае увеличено, чтобы получить соответствующую консистенцию. Таким образом, состав № 1 является контрольным образцом.

Предварительно в твёрдой питательной среде Мюллера-Хинтона на чашках Петри стерильным инструментом делали лунки диаметром 5 мм, проводили газонный посев культур, разведённых в соответствии со стандартом мутности по Мак Фарланду 0,5, заполняли лунки соответствующим образцом мази, инкубировали в течение суток при температуре 37 °С, измеряли диаметр зоны задержки роста культур в мм.

Результаты и обсуждение

Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2. Микробиологическая активность композиций мазей в отношении музейных штаммов АТСС и клинически значимых штаммов*.
Культуры клеток	Среда	Результат испытаний
Дрожжеподобные грибы рода Кандида		Состав № 1 (контроль)	Состав № 2	Состав № 3
Candida albicans	Сабуро	сплошной рост	зона неполной задержки роста (∅ 14-16 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 14-15 мм)
Candida tropicalis	Сабуро	зона неполной задержки роста (∅ 19 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 14-21 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 18-19 мм)
Candida krusei	Сабуро	сплошной рост	зона неполной задержки роста (∅ 14-15 мм)	сплошной рост
Грам+		состав № 1	состав № 2	состав № 3
Enterococcus faecalis	агар Мюллера-Хинтона	сплошной рост	сплошной рост	сплошной рост
Staphylococcus aureus	агар Мюллера-Хинтона	сплошной рост	сплошной рост	сплошной рост
Staphylococcus epidermidis	агар Мюллера-Хинтона	сплошной рост	сплошной рост	сплошной рост
Грампалочки		состав № 1	состав № 2	состав № 3
Citrobacter freundii	агар Мюллера-Хинтона	зона неполной задержки роста (∅ 10-11 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 11-12 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 17-18 мм)
Proteus mirabilis	агар Мюллера-Хинтона	зона неполной задержки роста (∅ 13-14 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 12-13 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 11-12 мм)
Escherichia coli	агар Мюллера-Хинтона	сплошной рост	зона неполной задержки роста (∅ 12-13 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 12-13 мм)
Escherichia coli PDR	агар Мюллера-Хинтона	сплошной рост	зона неполной задержки роста (∅ 16-17 мм)	зона неполной задержки роста (∅ 14-15 мм)
Неферментирующие бактерии		состав № 1	состав № 2	состав № 3
Pseudomonas aeruginosa	агар Мюллера-Хинтона	зона неполной задержки роста (∅ 11-12 мм)	сплошной рост	сплошной рост

Примечание. *Достоверных отличий в зонах задержки роста между 11 музейными культурами и 11 клинически значимыми штаммами не выявлено.

Исходя из данных таблицы, суммарный экстракт левзеи, полученный на основе спиртовых и масляного извлечений - состав № 1, обладает некоторой противомикробной активностью в отношении Candida tropicalis, энтеробактерий Citrobacter freundii и Proteus mirabilis, а также Pseudomonas aeruginosa. Состав № 3, содержащий только консервант, задерживает рост C. albicans, C. tropicalis, C. freundii, E. coli и E. coli PDR. Результаты анализа мази состава № 2, содержащей и консервант, и суммарное извлечение из левзеи несколько отличаются от ожидаемых, так задержка роста колоний была выявлена для всех исследуемых образцов культур Candida, а также Proteus mirabilis, Citrobacter freundii и обоих штаммов E. coli. Эффект можно объяснить бактериостатическим и микостатическим действием консерванта или основного компонента мази, в то же время, появляется значимый эффект против грибов вида Candida krusei и не наблюдается значимой задержки роста неферментирующих бактерий Pseudomonas aeruginosa, выявленной для состава без консерванта. Во-вторых, выяснено, что консервант не оказывает эффективного бактерицидного действия (не было выявлено зон полного отсутствия роста микроорганизмов), а только бактериостатическое, когда регистрировали зону неполной задержки роста, с некоторым количеством изолированных мелких колоний исследуемых культур. В-третьих, показано, что консервант в составе № 2 и № 3 мазей не эффективен против исследованных штаммов E. faecalis, S. epidermidis и S. aureus.

Проведенные исследования позволяют утверждать, что консервант Liquar Optima достаточно эффективен, особенно в композиции № 2, так как в некоторых случаях компоненты дополняют действие друг друга. Таким образом, в сочетании с предыдущими исследованиями, доказана его умеренная микробиологическая активность.

Литература

1. ГОСТ Р ИСО 21148-2011 Изделия косметические. Микробиология. Общие требования к микробиологическому контролю. - Введ. 2012-01-01. - М.: Изд-во стандартов, 2012. - 20 с.
2. Костина А.А. Биофармацевтические исследования по выбору вспомогательных компонентов для геля с экстрактом левзеи // Фармация и фармакология. - 2014. - № 3. - С. 3-6.
3. Костина А.А. и др. Разработка технологии и анализ полифракционного экстракта левзеи сафлоровидной // Успехи современного естествознания. - 2013. - № 11. - С. 133-135.
4. Тимофеев Н.П. Левзея сафлоровидная или "Легенда восточной медицины" [Электронный ресурс]. - Режим доступа: www.sciteclibrary.ru/rus/catalog/pages/1502.html. - Заглавие с экрана. - (Дата обращения 20.10.2015).
5. Тимофеев Н.П. и др. Оценка качества лекарственного растительного сырья левзеи сафлоровидной методом бромной антиаксидантной ёмкости // Бутлеровские сообщения. - 2006. - Т. 8, № 2. - С. 35-40.