2016 год № 4

Теоретическая и экспериментальная медицина

УДК 612.015.1:577.15.07:599.323.4

И.В. Толстенок, В.В. Брагина, М.Ю. Флейшман

Влияние глипролина (PGP) и его аргинисодержащего аналога (RGP) на процессы язвообразования в слизистой оболочке желудка белых мышей на модели НПВП-гастропатии

Дальневосточный государственный медицинский университет, 680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел. 8-(4212)-32-99-64, e-mail: marfl@yandex.ru, г. Хабаровск

Контактная информация: И.В. Толстенок, e-mail: toiv@bk.ru

Резюме:

Изучали протективные свойства PGP и RGP на модели индометацин-индуцируемого язвообразования. Оценивали площадь язвенно-эрозивных поражений СОЖ белых мышей на модели НПВП-гастропатии. Наблюдали формирование язвенно-эрозивных повреждений СОЖ после зондового введения индометацина. Площадь повреждения уменьшалась после пятикратного применения PGP и не изменялась после введения RGP. PGP, в отличие от RGP, обладает гастропротективными свойствами на модели НПВП-гастропатии.

Ключевые слова:

НПВП-гастропатия, язвы, глипролины

I.V. Tolstenok, V.V. Bragina, M.Yu. Fleishman

Influence of glyprolines on the ulcer disease in the mucous membrane of the stomach of white mouse on the NSAID-gastropathy model

Far Eastern State Medical University, Khabarovsk

Summary:

Protective properties of PGP and RGP on model of indomethacin-induced ulceration were studied. Area of ulceration in stomach of white mice was measured after modeling of NSAID-gastropathy. The ulcers were formed after enteral administration of indomethacin. The area of damage was reduced after the five-time use of PGP, and did not change after the introduction of the RGP. Unlike RPG, PGP has gastroprotective properties model of NSAID gastropathy.

Key words:

NSAID-gastropathy, ulcer, glyprolines

Введение

Нестероидные противовоспалительные препараты занимают ведущее место в фармакотерапии различных заболеваний [13]. Длительный прием НПВП, являющихся препаратами выбора при ревматизме и некоторых других заболеваниях, повышает риск возникновения нежелательных побочных эффектов (риск язвообразования) в 3-10 раз [11], а хронический прием НПВП провоцирует возникновение язв в 15-30 % случаев [12]. В терапии язвенной болезни желудочно-кишечного тракта применяется регуляторный пептид (РП) семейства опиоидов - даларгин, являющийся официнальным препаратом. Перспективным также считается РП семейства глипролинов - PGP. Глипролины, как класс регуляторных пептидов был выделен и классифицирован И.П. Ашмариным [1]. Олигопептиды глипролинового ряда имеют широкий спектр биологической активности, в том числе, противоязвенные эффекты на различных моделях (введение нестероидных противовоспалительных препаратов, этанола; стресс) [2, 6, 7, 9]. Нами была выбрана модель НПВП-гастропатии. Среди всех вышеприведенных способов моделирования язв, НПВП-гастропатию отличает то, что подобный процесс может развиваться на фоне длительного приема НПВП, и, порой с фатальным исходом [8].

Материалы и методы

Эксперимент проведен на 48 белых мышах-самцах (масса 23-28 г). Исследования соответствовали принципам Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации и приказа Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 № 708н "Об утверждении Правил лабораторной практики". Глипролины пролил-глицил-пролин (PGP) и аргинил-глицил-пролин (RGP) вводили животным внутрибрюшинно в дозе 1 мг/кг однократно в течение 5 суток. На 5-е сутки животные, кроме инъекции, интрагастрально получали индометацин (зондовое введение) в дозе 250 мг/кг. Контрольная группа животных получала эквиобъемное количество 0,9 % раствора хлорида натрия. Животные выводились из эксперимента путем декапитации на 7-е сутки, предварительно мыши оглушались скользящим движением инструмента по затылочной части черепа. Извлеченный желудок разрезали по большой кривизне, расправляли на предметном стекле. Фотографировали зону поражения слизистой оболочки с помощью лупы ×6. Полученные изображения СОЖ загружались в систему "МЕКОС-Ц", измеряли площадь поражения с применением оригинального программного обеспечения. Статистическую обработку результатов проводили с помощью t-критерия Стьюдента, различия считали достоверными при p<0,05. Предварительно малые выборки проверялись на нормальность распределения по асимметрии и эксцессу. Использовали программное обеспечение Statistica 6.0 и Microsoft Office Excel.

Результаты и обсуждение

Введение животным индометацина привело к формированию язвенно-эрозивных повреждений (таблица). Инъекции PGP и RGP вызывали единичные изъязвления слизистой оболочки желудка (СОЖ), составляющие для глипролинов PGP и RGP - 0,42±0,06 и 0,46±0,14 мм² соответственно (таблица). На модели экспериментальной НПВП-гастропатии, в группе "PGP + индометацин" отмечали достоверное снижение язвенно-эрозивных повреждений СОЖ. В группе "RGP + индометацин" не отмечали коррекции площади язвенно-эрозивных повреждений СОЖ по сравнению с группой "индометацин" (таблица).

Таблица. Влияние пептидов PGP и RGP на площадь язвенно-эрозивных повреждений в слизистой оболочке желудка белых мышей, получавших индометацин (M±m)
Экспериментальная группа	Площадь язв, мм²
Контроль, n=8	-
PGP, n=8	0,42±0,06*
RGP, n=9	0,46±0,14*
Индометацин, n=7	3,23±0,24
PGP + индометацин, n=8	0,37±0,01*
RGP + индометацин, n=8	3,42±0,70

Примечание. * - p<0,05 по сравнению с группой "Индометацин".

В исследовании на крысах [5] глипролин RGP демонстрировал защитные эффекты на модели этанолового язвообразования в дозе 1 мг/кг. По результатам настоящего исследования, площадь язвенно-эрозивных дефектов в СОЖ у мышей, получавших индометацин на фоне пятикратного введения глипролина PGP, уменьшалась в 8,7 раза по сравнению с группой мышей, получавших только индометацин. Глипролин RGP на модели НПВП-гастропатии не влиял на площадь язв в СОЖ белых мышей. Можно предположить, что, как и в наших предыдущих исследованиях [10], отсутствие профилактики язвенных поражений глипролином RGP опосредуется инверсией эффектов системы NOS-NO [4]. В зависимости от концентрации и редокс-фона окись азота способна запускать каскады реакций, направленных на пролиферацию, либо на апоптоз [14]. В проведенных ранее в ЦНИЛ исследованиях аргинин-содержащий пептид даларгин (Туr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg), введенный в дозе в 10 раз меньше (100 мкг/кг), проявлял защитное действие в СОЖ экспериментальных животных [3].

Выводы

PGP, в отличие от RGP, обладает гастропротективными свойствами на модели НПВП-гастропатии.
Отсутствие защитного действия глипролина RGP на СОЖ может быть обусловлено высокой дозой пептида (1 мг/кг).

Литература

1. Ашмарин И.П. Каменский А.А., Ляпина Л.А. и др. Глипролины как самостоятельные регуляторы и стабилизаторы других пептидов // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2002. - № 1. - С. 24.
2. Бакаева З.В., Бадмаева К.Е., Желязник Н.Я. и др. Протекторный эффект внутрибрюшинного и внутрижелудочного введения PGP на этаноловое эрозирование и ацетатное язвообразование у крыс // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2004. - № 4. - С. 82-84.
3. Животова Е.Ю., Лебедько О.А., Флейшман М.Ю. и др. Участие регуляторных пептидов в регуляции тканевого гомеостаза слизистой оболочки желудка // Дальневосточный медицинский журнал. - 2013. - № 1. - С. 101-105.
4. Животова Е.Ю., Масленникова Н.В., Флейшман М.Ю. и др. Система NOS-NO - универсальное звено в реализации гастропротективных эффектов опиоидных пептидов // Дальневосточный медицинский журнал. - 2011. - № 4. - С. 83-86.
5. Мерчиева С.А. Влияние коротких глипролинов с присоединенными к N- или C-концам аминокислотными остатками аргинина или лейцина на устойчивость слизистой оболочки желудка к действию стресса // Материалы Международного молодежного научного форума "ЛОМОНОСОВ-2010" / Отв. ред. И.А. Алешковский, П.Н. Костылев, А.И. Андреев, А.В. Андриянов [Электронный ресурс] - М.: МАКС Пресс, 2010. - С. 279-280. - Режим доступа: http://lomonosov-msu.ru/archive/Lomonosov_2010/02.pdf.
6. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Умарова Б.А. и др. Некоторые механизмы противоязвенных эффектов глипролинов // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2011. - Т. 9, № 4. - С. 58-64.
7. Сангаджиева А.Д., Бакаева З.В., Самонина Г.Е. и др. Изменение цитокинового профиля крыс при протекторных противоязвенных эффектах глипролинов. Влияние глипролинов (PGP и N-Acetyl-PGP) на экспрессию генов цитокинов при этаноловом повреждении желудка // Вестник Московского университета. Серия 16: Биология. - 2013. - № 2. - С. 7-11.
8. Трухан Д.И. Выбор нестероидного противовоспалительного препарата с позиций профилактики НПВП-гастропатии и лекарственной безопасности // Consilium Medicum. - 2014. - Т. 16, № 8. - С. 34-39.
9. Фалалеева Т.М., Самонина Г.Е., Береговая Т.В. и др. Влияние глипролинов PGP, GP, PG на гомеостаз слизистой оболочки желудка при этаноловой модели язвообразования у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 149, № 6. - С. 637-639.
10. Флейшман М.Ю., Толстенок И.В., Лебедько О.А. и др. Влияние глипролинов на синтез ДНК и свободнорадикальное окисление в слизистой оболочке желудка мышей в физиологических условиях и при приеме нестероидных противовоспалительных препаратов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2015. - Т. 159, № 4. - С. 500-503.
11. Хотимченко М.Ю., Разина Т.Г., Шилова Н.В. и др. Профилактический эффект альгината кальция при повреждении слизистой оболочки желудка, вызванном индометацином, у крыс // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2007. - № 4. - С. 42-44.
12. Laine L., Kivitz A.J., Bello A.E. Double-blind randomized trials of single-tablet ibuprofen/high-dose famotidine vs. ibuprofen alone for reduction of gastric and duodenal ulcers // American Journal of Gastroenterology. - 2012. - Vol. 107, № 3. - P. 379-386.
13. Svintsitskyi A. NSAID-gastropathy: current state of the problem // Крымский терапевтический журнал. - 2010. - Т. 2, № 2 (15). - С. 280-286.
14. Thomas D.D., Ridnour L.A., Isenberg J.S., et al. The chemical biology of nitric oxide: implications in cellular signaling // Free Radical Biology and Medicine. - 2008. - Vol. 45, № 1. - P. 18-31.