2017 год № 1

Фармакология и фармация

УДК 543.544.943.3.068.7:615.07

А.М. Лазицкая¹, Н.В. Чмелевская¹, Е.А. Илларионова²

Спектрофотометрический анализ бромдигидрохлорфенилбензодиазепина

¹Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы, 664022, бул. Гагарина, 4, тел. 8-(3952)-24-37-67;
²Иркутский государственный медицинский университет, 664003, ул. Красного Восстания, 1, тел. 8-(3952)-24-08-26, г. Иркутск

Контактная информация: А.М. Лазицкая, e-mail: anlaz2005@yandex.ru

Резюме:

Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенил-бензодиазепин в субстанции и таблетках, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения метилового красного. Обоснованы оптимальные условия определения: выбор раствора сравнения, растворитель - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, аналитическая длина волны - 290 нм. Определен коэффициент пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило не более 0,003, для таблеток не более 0,008.

Ключевые слова:

бромдигидрохлорфенилбензодиазепин, УФ-спектр, спектрофотометрическое определение, оптический образец сравнения, коэффициент пересчета, метиловый красный

А.М. Lazitskaya¹, N.V. Chmelevskaya¹, E.A Illarionova²

Spectrophotometric analysis of bromdigidrohlorfenilbenzodiazepin

¹Irkutsk regional agency judicial-medical expert operation;
²Irkutsk State Medical University, Irkutsk

Summary:

The unified technique of spektrofotometrichesky definition of a bromdigidrohlorfenilbenzodiazepin in substance and tablets differing in use as an example of methyl red comparison is developed. Optimum conditions of definition are proved: a comparison solution choice, solvent - 0,1 M hydrochloric acid solution, analytical wavelength - 290 nm. The recalculation coefficient is defined. The relative standard deviation of the developed technique for substance made no more than 0,003, for tablets no more than 0,008.

Key words:

bromdigidrohlorfenilbenzodiazepin, UV spectrum, spectrophotometric determination, optical reference sample, conversion factor, methyl red

Введение

Широкое применение в медицинской практике в качестве анксиолитического средства находит бромдигидрохлорфенилбензодиазепин (I) [6]. Существующие методы оценки качества I в субстанции и таблетках не соответствуют современным требованиям [3, 7]. Они имеют ряд недостатков: трудоемкость, длительность выполнения, применение токсичных органических растворителей, дорогостоящих реактивов. Это свидетельствует о том, что проблема совершенствования существующих и разработка новых методов анализа I является актуальной. Перспективно использование нового варианта спектрофотометрического метода, основанного на применении оптических образцов сравнения. Использование этого метода позволит выполнять количественное определение препарата в субстанции и лекарственных формах одним и тем же методом, повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить трудоемкость, стоимость, токсичность и погрешность анализа.

Целью настоящего исследования является разработка новой методики количественного определения I спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения.

Материалы и методы

В работе использовали фармацевтическую субстанцию I и таблетки I по 0,001 г, отвечающие требованиям нормативных документов [3, 7], метиловый красный квалификации "х.ч.", 0,1 М раствор натрия гидроксида, приготовленный из фиксанала, 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, приготовленный из фиксанала, воду очищенную. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-2000 в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью универсального ионометра ИТ-1101.

При статистической обработке результатов анализа использовали методы Стьюдента и Фишера [1]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Для оптимизации условий спектрофотометрического определения I был изучен спектр поглощения в интервале рН 1,1-13,0 в диапазоне длин волн 220-400 нм. Спектр поглощения I в интервале рН от 10-13,0 характеризуются двумя полосами с максимумами поглощения при длинах волн 230±4 нм и 342±4 нм. При уменьшении кислотности среды (рН 1,1) наблюдается увеличение интенсивности поглощения вещества c одновременным батохромным смещением максимума поглощения. Спектр поглощения в этом случае имеет два максимума при 245±1 нм и 290±2 нм.

Изучение стабильности растворов I показало, что наиболее устойчив раствор I с рН 1,1. Поэтому в качестве оптимального растворителя для спектрофотометрического определения I нами был выбран 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,1).

Для количественного определения I в субстанции спектрофотометрическим методом необходимо выбрать образец сравнения. Выбор оптических образцов сравнения осуществляли исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения [4, 5].

В качестве оптического образца сравнения для определения I использовали вещество органической природы метиловый красный. Метиловый красный выпускаются серийно промышленностью квалификации хч, на него имеется ТУ (ТУ 6-09-5169-84), регламентирующий его качество, он доступен, имеет низкую стоимость, содержание в нем основного вещества определено химическим методом и составляет не менее 99,9 %.

Спектры поглощения растворов метилового красного в интервале рН 1,1 характеризуются двумя полосами с максимумами поглощения при 290±1 нм и 515±5 нм [2].

Аналитическая длина волны I (290 нм) входит в интервал оптимальный для метилового красного (280-300 нм), поэтому метиловый красный может быть предложен в качестве оптического образца сравнения для спектрофотометрического определения I. Следует отметить, что у метилового красного и I совпадают максимумы поглощения 290 1 нм. Следовательно, можно предположить, что погрешность анализа I при отмеченных выше оптимальных условиях не будет превышать допустимую.

Значения удельных показателей поглощения исследуемого вещества и оптического образца сравнения различаются, поэтому для учета данных факторов в формулу расчета результатов количественного определения I необходимо ввести коэффициент пересчета, который представляет собой отношение удельного показателя поглощения оптического образца сравнения и удельного показателя поглощения рабочего образца сравнения. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа I по метиловому красному приведены в таблице 1.

Таблица 1. Результаты определения коэффициента пересчета бромдигидрохлорфенилбензодиазепина по метиловому красному
Метрологические характеристики (n=10, Р=95 %)
К	S²	S	Sх	ΔХ	Е %	S_r
1,0999	0,0828	0,2871	0,0910	0,2056	0,21	0,003

Разработанные оптимальные условия спектрофотометрического определения I были использованы для количественного определения субстанции и таблеток данного препарата. Результаты количественного определения I в субстанции и таблетках приведены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты спектрофотометрического определения феназепама в субстанции по оптическому образцу сравнения метиловому красному
Метрологические характеристики (n=10, P=95%)
Субстанция бромдигидрохлорфенилбензодиазепина
Х	S²	Sх	S	ΔХ	Е%	S_r
99,91	0,0922	0,3037	0,0960	0,2170	0,22	0,003
Таблетки бромдигидрохлорфенилбензодиазепина по 0,001 г
108,70	0,8424	0,9178	0,3469	0,8326	0,77	0,008
108,90	0,5774	0,7599	0,2872	0,6893	0,63	0,007
108,72	0,1564	0,3955	0,1495	0,3588	0,33	0,004

Из представленных в таблице 2 данных следует, что спектрофотометрическое определение I в субстанции и таблетках по оптическому образцу сравнения метиловому красному соответствует нормативным требованиям. Относительная ошибка определения не превышает 0,22 % для субстанции и 0,77 % для таблеток. Методика спектрофотометрического определения с использованием оптического образца сравнения характеризуется хорошей воспроизводимостью (S_r не превышает 0,008). В таблице 3 представлены результаты сравнительной оценки методов количественного определения I по разработанной методике и методике нормативного документа [3]. Видно, что метод спектрофотометрического определения I по метиловому красному и метод нормативного документа дают правильные результаты (t_выч.табл.) и не различаются по воспроизводимости (F_выч.табл.). Однако методика нормативного документа не является правильной, так как имеет систематическую погрешность (t_выч.>t_табл.), уступает спектрофотометрическому методу по продолжительности анализа и требует использования токсичных и летучих растворителей (ледяная уксусная кислота, уксусный ангидрид).

Таблица 3. Сравнительная оценка методов количественного определения I (n=9, t (P, f)(табл.)=2,26; Р=95 %; F (P, f1, f2)(табл.)=5,47; Р=99 %)
Наименование метода	μ	Х,%	S²	S	Е,%	t_выч.	F_выч.	Продолжительность анализа, мин.	Число операций
Ацидиметрия в ледяной уксусной кислоте	100	98,50	0,25	0,5	0,69	8,49	2,78	40	6
Спектрофотометрия по метиловому красному	100	99,96	0,09	0,3	0,27	0,39		25	6

Валидационную оценку разработанной методики спектрометрического определения бромдигидрохлорфенилбензодиазепина с использованием оптического образца сравнения метилового красного проводили по критериям: специфичность, правильность, прецизиозность, линейность результатов, аналитическая область методики. Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствуют о пригодности предложенной методики.

Таблица 4. Результаты валидационной оценки методики спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенилбензодиазепина
Параметры	Критерии валидности	Результаты испытания
Специфичность		Специфична
Правильность	t_выч.<t_табл.	t_выч.=0,39, (t_табл.=2,36), n=9
Прецизионность	RSD<2 %	0,30 %
Линейность результатов	r≥0,999	r=0,9990; y=0,2683·х-0,2273
Аналитическая область методики	интервал концентраций	0,008-0,012 г/мл

Разработанная методика спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенилбензодиазепина по оптическому образцу сравнения метиловому красному отличается доступностью, экспрессностью, высокой воспроизводимостью, отсутствием высокотоксичных реактивов.

Литература

1. Государственная Фармакопея. - Т. 1. - 13-е. изд. - 2015. - 1470 с.
2. Илларионов А.И., Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Количественное определение натриевой соли 4-(никотиноиламино) масляной кислоты спектрофотометрическим методом // известия высших учебных заведений. Физика. - 2011. - № 2. - С. 174-179.
3. Нормативный документ 42-14110-06. Феназепам. - 5 с.
4. Теплых А.Н., Илларионова Е.А. Количественное определение метронидазола спектрофотометрическим методом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2009. - Т. 88, № 5. - С. 48-50.
5. Теплых А.Н., Илларионова Е.А. Количественное определение тинидазола спектрофотометрическим методом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2010. - Т. 99, № 8. - С. 64-66.
6. Регистр лекарственных средств России. - 19-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РЛС-МЕДИА, 2010. - 1368 с.
7. Фармакопейная статья предприятия ОАО "Валента Фармацевтика" № 42-5293-08 Таблетки феназепама по 0,5 мг, 1 мг и 2,5 мг.