2017 год № 4

Стоматология

УДК 616.3:616-071.7:616-076 (045)

Н.В. Стрельникова^1,2, А.А. Антонова¹, И.П. Кольцов¹, В.Б. Туркутюков³, Е.Л. Старовойтова¹, И.Н. Алексеева⁴, В.И. Гермаш¹

Новые возможности микроскопического метода исследования нативного соскоба корня языка в стоматологии, гастроэнтерологии и микробиологии

¹Дальневосточный государственный медицинский университет, 680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел. 8-(4212)-76-13-96, e-mail: nauka@mail.fesmu.ru;
²Краевая клиническая больница № 1 им. проф. С.И. Сергеева, 680009, ул. Краснодарская, 9, тел. 8-(4212)-39-04-05, e-mail:kkb1@dvmc.khv.ru;
³Тихоокеанский государственный медицинский университет, 690002, пр-т Острякова, 2, тел. 8-(423)-242-97-78, e-mail:mail@tgmu.ru, г. Владивосток;
⁴Краевая клиническая психиатрическая больница, 680038, ул. Серышева, 33, тел. 8-(4212)-56-04-41, e-mail:hkpb@rambler.ru, г. Хабаровск

Контактная информация: Н.В. Стрельникова, e-mail: jpdom@mail.ru

Резюме:

Микробиома корня языка человека изучена недостаточно, при очевидной доступности биотопа. Предложен способ микроскопии соскоба корня языка, окрашенного по Граму и интерпретация данных. Рассмотрены перспективы изучения микробиома полости рта и слизистой оболочки языка, критерии диагностики лептотрихиоза и обезвоженности слизистых оболочек полости рта, риска развития кариеса. В 2006-2016 гг. у 2 900 человек от 1 года до 88 лет проведена микроскопия соскобов, микробиологическая диагностика, клинический осмотр, анкетирование, статистическая обработка данных.

Ключевые слова:

микробиома корня языка, микроскопические исследования, метод Грама, кариес зубов у детей, лептотрихиоз полости рта, обезвоженность слизистых оболочек полости рта

N.V. Strelnikova^1,2, A.A. Antonova¹, I.P. Koltsov¹, V.B. Turkutyukov³, Е.L. Starovoytova¹, I.N. Alekseyeva⁴, V.I. Germash¹

New potentials of microscopic method of examination of scraping of the tongue root in dentistry, gastroenterology and microbiology

¹Far Eastern State Medical University;
²Regional clinical hospital № 1 of Khabarovsk Region Health Ministry, Khabarovsk;
³Pacific State Medical University, Vladivostok;
⁴Regional clinical psychiatric hospital of Khabarovsk Region Health Ministry, Khabarovsk

Summary:

The microbioma of the tongue root, with its obvious availability, is poorly studied in microbiocenosis of the human normal flora. The method of clinical diagnostic studies of scraping the tongue root, dyed by the method of gram staining and interpretation of the data were carried out. The potentials for the study of the microbioma of the oral cavity and mucous membrane of the tongue in the dental practice were analyzed. The authors worked out the criteria for diagnostics of leptotrichiosis of the oral mucous membranes, a tentative method for diagnosing the risk of dental caries, determined the dehydration of the mouth. In the period throughout 2006-2016 the authors performed microscopy scrapings of the tongue in more than 2 900 people aged from 1 to 88 years of different clinical groups with simultaneous microbiological diagnostics, clinical examination, questionnaires, and statistical processing of data analysis.

Key words:

microbioma of the tongue root, microscopic tests, method of Gram staining, dental caries in children, leptotrichiosis of the mouth, dehydration of the mucous membranes of the mouth

Введение

Известной составляющей качества жизни и здоровья человека является сбалансированная микрофлора полости рта [2, 3, 4, 5, 10, 11]. Развитие специфических и неспецифических воспалительных процессов полости рта, кариеса, ГВЗ, обезвоживания, связано с изменением качественного и количественного состава орального микробиоценоза [1, 2, 3, 4, 5, 10, 11, 12]. Доступные клинико-диагностические методы при заболеваниях полости рта ограничены [5, 6, 7, 8, 9].

Материалы и методы

Проведено 2 900 микроскопических исследований нативного соскоба слизистой корня и спинки языка, в 3 репрезентативных группах: 1-я группа - 2664 человека, для изучения распространенности лептотрихий в Хабаровском крае, от 1 года до 88 лет. 2-я группа - 133 человека, от 1 года до 71 года с проявлениями воспалительного процесса СОПР, включая лептотрихиоз, сопровождающегося обезвоживанием слизистых оболочек полости рта. 3-я группа - 103 ребенка 3 лет. Определяли кпу зубов, кариесогенность зубного налета по Hardwick J. L. в модификации Недосеко В.Б., гигиенический индекс по Э.М. Кузьминой, обсемененность S. mutans окклюзионной, вестибулярной поверхностей и межзубного промежутка молочных зубов нижней челюсти, спинки языка и слюны. Степень колонизации S. mutans оценивали по инструкции "Dentocult SM Strip Mutans" и сравнивали с эталонной картой. Биоматериал для микроскопии брали на границе задней и средней трети спинки языка, мазки окрашивали по Граму, микроскопию проводили с иммерсией, на микроскопе Zeiss, Primo Star [8, 9]. Определяли количество, морфологию и размеры бактерий, грам+ или грам- клетки, лептотрихии, кандиды, коэффициенты коадгезии, соадгезии и гистадгезии, количество и характеристику клеток и ядер эпителия [6, 7, 8, 9]. Для микробиологического исследования делали забор из патологических очагов полости рта, спинки языка. Культивирование, чувствительность к антибиотикам проводили по приказу МЗ СССР № 535, МУК 4.2.1980-04.

Результаты и обсуждение

Выявлена высокая распространенность резидентов полости рта рода Leptotrichia. Степень обсеменности взрослых 98,06±1,09 %, детей 88±4,62 %. При наличии хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, выявляли лептотрихии, длиной 40-100 мкм, схожие с нитями, в 99,02±0,03 %, прямую сильную корреляционную связь между наличием гастрита и язвы желудка и увеличением длины лептотрихий (r_xy=0,83, р<0,01; r_xy=0,81, р<0,01). При высокой активности кариозного процесса у детей и взрослых, среднем индексе кпу 16,34±3,34. регистрировали высокий и очень высокий индекс коадгезии микробов разных видов к поверхности лептотрихий, до 69,89±21,24 % клеток на одной особи у 95,17±3,21 % обследованных, наблюдалась прямая связь показателя кпу с коадгезией (r_xy=0,63, р<0,05).

У всех пациентов 2-й группы патологический процесс сопровождался воспалительной реакцией со стороны десен. Доля пациентов с гингивитом тяжелой степени составила 21±4,32 %, средней - 62±1,5 %, легкой - 17±3,8 %. Выделены микробы, в ассоциациях по 2-4 вида. Энтеробактерии выявляют при увеличении тяжести процесса. Титр энтерококков увеличивается при тяжелых гингивитах в 2 раза, р<0,05. В таблице 1 представлен состав микробиома языка.

Таблица 1. Часто выделяемые виды микробиомы слизистой языка
Вид микроорганизмов	Степень тяжести гингивита (n=133)
Вид микроорганизмов	легкая (n=23)	средняя (n=82)	тяжелая (n=28)
Enterococcus faecalis	46,4±1,9*	64,7±0,9*	88,91±1,2*
Streptococcus pyogenes группы А	20,78±1,2*	28,12±1,1*	31,38±0,7*
Streptococcus viridans	50,65±1,8*	45,36±1,8*	34±1,5*
Enterobacteriaceae	-	16,48±1,3*	31,53±1,5*

Примечание. * - р<0,05 - значимость различий в группах.

Проводилось микроскопическое исследование корня языка при стоматитах, гингивитах, кариесе зубов. В 38±5,5 % выявили лептотрихии, более 30-60 в поле зрения, в 23±3,5 % кандиды. При дисбиозе в 68±4,5 % случаев наблюдали большое количество микроорганизмов, у 90±1,7 % взрослых и у 85±2,6 % детей шаровидные скопления микроорганизмов, их выраженную коадгезию, соадгезию и гистадгезию. Объективно выявляли сухость слизистой языка и СОПР, недостаточный объем и большую вязкость слюны. При опросе выясняли, что пациенты пьют мало воды, заменяя ее на чай, кофе, какао, сок, квас, пиво. Воду пьют менее 10 % детей, предпочитая газированные напитки, соки, компот в 40,79±3,74 %. По результатам общего исследования: средний индекс КПУ у всех детей составил 3,32±0,31. Гигиенический индекс - 0,61±0,12, что соответствует плохой гигиене полости рта. Определена обезвоженность по характерным скоплениям микробов, и по увеличению общего количества микроорганизмов полости рта, между показателями установлена сильная корреляционная связь (r_xy=0,5, р<0,01; r_xy=0,45, р<0,01). После соблюдения питьевого режима: за 20-30 минут до еды, в 92±1,71 % случаев пациенты не предъявляли жалобы на дискомфорт, отмечалось уменьшение воспаления. У детей снижалась скорость образования зубного налета, в мазках отмечалось сокращение общего количества микробов, снижалась их склонность к коадгезии, соадгезии и гистадгезии, отсутствовали скопления микробов с вязкой слизью [8, 9]. Результаты отражены в таблице 2.

Стоматологическое обследование детей 3-й группы показало высокую интенсивность кариеса 3,34±0,29 при низком уровне гигиены полости рта - 0,63±0,03, преобладал компонент "к" - 3,01±0,3. Кариесогенность зубного налета 2,33±0,05. Установлена прямая сильная связь КПУ с наличием хронических заболеваний у матерей (r_xy=0,45, р<0,01; r_xy=0,5, р<0,01). У детей, пьющих на ночь подслащенные напитки и соки характерно наличие прямой сильной корреляционной связи с высоким индексом КПУ (r_xy=0,82, р<0,01) и прямой связи с плохой гигиеной полости рта и выраженным КЗН (r_xy=0,61, р<0,05; r_xy=0,41, р<0,05). Преобладание на поверхности языка S. mutans >1 000 000 КОЕ/мл, с наименьшим их титром в слюне <100 000 КОЕ/мл (р<0,001). Результаты исследования являются основанием планирования программ профилактики кариеса у детей раннего возраста с учетом стоматологического статуса и уровня обсемененности кариесогенными бактериями [1, 6, 7, 9]. После проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий статус улучшился: изменился компонент "п" - 2,25±0,03 индекса КПУ, достоверно, в 3 раза (р<0,001), уменьшился ГИ - 0,14±0,02, кариесогенность зубного налета уменьшилась с 2,33±0,05 до 1,57±0,04 (р<0,001). Обсемененность S. mutans поверхности языка уменьшилась с 2,27±0,09 до 0,80±0,05 (р<0,001), межзубного промежутка с 2,17±0,09 до 0,57±0,05 (р<0,001). Титр Streptococcus mutans в биотопах вестибулярной и окклюзионной поверхностей зубов, слюны уменьшился с 2,10±0,11 до 0,67±0,07 (р<0,001) и до 0,57±0,06 (р<0,001), с 1,90±0,09 до 0,47±0,05 (р<0,001), соответственно, в 2,0-4,0 раза (р<0,001).

Таблица 2. Микроскопия соскоба слизистой языка до и после применения воды
Признак недостатка воды	Гингивит, стоматит (n=83)		Кариес зубов (n=92)
Признак недостатка воды	до	после	до	после
Скопления микробов	96,4±1,2*	14,7±0,3*	88,91±1,2*	16,7±0,7*
Коадгезия и соадгезия	89,88±1,2*	38,12±1,1*	61,38±0,7*	28,12±1,1*
Гистадгезия	50,65±1,8**	43,32±1,9**	54,3±1,8**	45,36±1,9**

Примечание. * - р<0,001, ** р<0,01 - значимость различий в группах.

Выводы

Способ характеризует качественный и количественный состав микробиома корня языка, может применяться в стоматологии, гастроэнтерологии и микробиологии, как скрининг-диагностика в группах риска развития кариеса зубов, патологии желудка и кишечника [8].
Способ выявляет обезвоженность слизистых полости рта, может применяться для контроля состояния водно-электролитного баланса, для коррекции и сокращения сроков лечения заболеваний СОПР и кариеса зубов, индивидуального подхода к пациенту [8, 9].
Наличие лептотрихий более чем 15-20 в каждом из 10 полей зрения, клеток слущенного эпителия более 8-10 и субъективные жалобы свидетельствуют о лептотрихиозе СОПР.
Высокая пораженность кариесом зубов детей обусловлена плохой гигиеной, низкой профилактической активностью родителей. Степень обсеменения S. mutans слюны, вестибулярной и окклюзионной поверхности зубов низкая у детей с кпу, не более 4. Максимальная обсемененность КОЕ 10⁶/мл S. mutans - поверхность языка у детей с КПУ = 4-7. Это позволяет планировать программу профилактики кариеса зубов у детей с учетом биотопа - места донации патогенных стрептококков - корня языка и зубного налета межзубных промежутков [6, 7].
Способ внедрен и востребован в учреждениях здравоохранения Хабаровского края, он может быть предложен в качестве стандарта качества оказания медицинской помощи в стоматологии и гастроэнтерологии.

Литература

1. Антонова А.А., Чирикова Е.Л. Распространенность и интенсивность кариеса зубов у детей раннего возраста в Хабаровском крае // Инновационные технологии в биологии и медицине: научные труды Х международного конгресса "Здоровье и образование в ХХI веке". - М.: РУДН, 2009. - С. 985-986.
2. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Журнал микробиология, эпидемиология и иммунология. - 1999. - № 6. - С. 102-105.
3. Кузнецов Е.А., Царев В.Н. и др. Микробная флора полости рта и ее роль в развитии патологических процессов. - М., 1996. - 74 с.
4. Кузьмина Э.М., Кузьмина И.Н., Петрина Е.С. Стоматологическая заболеваемость населения РФ. Состояние тканей пародонта и слизистой оболочки рта / Под ред. проф. Янушевича О. М. - 2009. - 236 с.
5. Леонтьев В.К., Кисельникова Л.П. Детская терапевтическая стоматология. Национальное руководство. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017. - 952 с.
6. Старовойтова Е.Л., Стрельникова Н.В., Антонова А.А. Микробиома языка как прогностическая модель для определения обсемененности кариесогенными бактериями Streptococcus mutans твердых тканей зубов у детей раннего возраста // Заявка на патент РФ № 2017126914/15(046388), 26.07.2017. - Уведомление: положительный результат формальной экспертизы заявки на изобретение, 31.08.2017.
7. Старовойтова Е.Л., Стрельникова Н.В., Антонова А.А. Способ неспецифической донозологической профилактики и лечения кариеса зубов детей раннего возраста // Заявка на патент РФ № 2017128961/15(050119), 14.08.2017. - Уведомление: положительный результат формальной экспертизы заявки на изобретение, 15.09.2017.
8. Стрельникова Н.В., Антонова А.А., И.П., Елистратова М.И., Алексеева И.Н. Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка // Патент России № 2549989, 2015. - Бюл. № 13.
9. Стрельникова Н.В., Антонова А.А., Старовойтова Е.Л., Гермаш В.И., Алексеева И.Н. Микроскопический способ определения обезвоженности тканей полости рта на модели микробиома языка // Заявка на патент РФ № 2017130096/14(052406), 24.08.2017. - Уведомление: положительный результат формальной экспертизы заявки на изобретение, 12.09.2017.
10. Тец В.В. Роль микрофлоры полости рта в развитии заболеваний человека // Стоматология. - 2008. - № 3. - С. 76-80.
11. Чайковская И.В., Осипенкова Т.С. Микробиоценоз полости рта в норме и при кариесе // Архив клин. и эксперим. медицины. - 2002. - Т. 11, № 3 - С. 394-397.
12. Leong P.M., Gussy M.G., et al. A systematic review of risk factors during first year of life for early childhood caries // Intern. Journal of Pediatric Dentistry. - 2013. - Vol. 23, № 4. - P. 235-250.