2024 год № 2

Аннотация:

Ключевые слова:

Abstract:

Key words:

Введение

В течение последних 30 лет широко проводится лечение бесплодия у супружеских пар с применением вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) - экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ICSI) [1, 2, 3, 4, 5, 6]. При этом наступление беременности у партнерши регистрируется примерно в 40-45 % случаях [5]. Поскольку указанные процедуры в России проводятся, в том числе, за счет средств обязательного медицинского страхования, встает вопрос об эффективности расходования финансов. С этих позиций актуальной является необходимость поиска предикторов результативности программ ВРТ [1, 3].

Одним из факторов, повышающих вероятность наступления беременности у партнерши в супружеской паре, является использование при ЭКО эякулята партнера с более качественными характеристиками [5, 6, 7, 8, 9, 10, 11]. Отмечена также взаимосвязь изменения содержания белков протеома семенной плазмы (СПл) с показателями концентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов [12, 13, 14, 15, 16, 17].

В практике клинико-диагностических лабораторий широко проводится исследование прокальцитонина (ПКТ) в сыворотке крови для диагностики септических заболеваний и оценки тяжести синдрома системной воспалительной реакции [18]. Данный протеин определяли также в эякуляте. Установлено, что в образцах спермы со сниженным содержанием сперматозоидов уровень ПКТ статистически значимо выше, чем в образцах фертильного эякулята [14].

Представляется актуальным рассмотреть показатель концентрации ПКТ в СПл в качестве критерия инфертильности мужчин при лечении бесплодия в супружеских парах с применением ЭКО.

Цель исследования - оценить фертильность эякулята, использующегося при реализации программ ВРТ, по концентрации прокальцитонина в семенной плазме.

Материалы и методы

В исследование были включены 104 мужчины, средний возраст которых составил 33,4±8,7 лет, проходивших обследование с целью уточнения причины бесплодного брака. Исследование выполнено с соблюдением этических принципов проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов, изложенных в Хельсинской декларации ВОЗ.

Образцы эякулята собирали после 2-4 дней полового воздержания и оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ [11]. Объем эякулята определяли гравиметрически, рассчитывая разницу массы пустого контейнера и контейнера с материалом обследуемых. Для подсчета концентрации и общего количества сперматозоидов, а также оценки их подвижности использовали анализатор спермы SQA-V ("MES", Израиль). СПл отделяли центрифугированием образцов при 3000 об./мин.

Концентрацию ПКТ в СПл определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-системы "Белок, связывающий жирные кислоты, - ИФА - БЕСТ" (номер по каталогу А-9004; ООО "Вектор-Бест", Россия). Оптическую плотность проб регистрировали на вертикальном фотометре StatFax 3200 ("Awareness", США).

В зависимости от результатов лабораторного анализа спермы [11] обследованные были разделены на две группы. В основную группу (n=56) вошли мужчины из супружеских пар, которые проходили лечение по поводу бесплодия с применением ВРТ - ЭКО/ICSI. Фертильность спермы пациентов данной группы была снижена, эякулят характеризовался уменьшением концентрации сперматозоидов и/или их общего содержания (олигоастенозооспермия различной степени тяжести) [11].

Группа сравнения (n=48) была представлена обследованными с нормальными показателями концентрации и общего содержания сперматозоидов в эякуляте [11] (табл. 1).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ STATISTICA v. 7. Для каждого массива данных рассчитывали параметры описательной статистики: среднюю арифметическую (М), стандартное отклонение (SD), медиану (Me) и интерквартильный диапазон (25 % - 75 %), а также минимальное (min) и максимальное (max) значение. Массивы данных оценивали на наличие и степень выраженности выбросов.

По результатам оценки с использованием критерия Шапиро - Уилка была отвергнута нулевая гипотеза о нормальном характере их распределения и равенстве дисперсий выборок, что послужило основанием для отказа от использования параметрических критериев при выполнении дальнейшего статистического анализа.

Для сравнения двух независимых выборок использовали U-критерий Манна - Уитни. Количественную оценку линейной связи между двумя случайными величинами определяли с использованием коэффициента ранговой корреляции (R) Спирмена. За максимально приемлемую вероятность ошибки первого рода (р) принимали величину уровня статистической значимости, равную или меньшую 0,05.

С позиции доказательной медицины для выявления информативности использования концентрации ПКТ в СПл в качестве критерия фертильности эякулята у мужчин основной группы была определена предсказательная ценность положительного и отрицательного исходов ВРТ путем расчета диагностической чувствительности (ДЧ), диагностической специфичности (ДС) и диагностической эффективности (ДЭ) [19]. Было выбрано следующее значение точки разделения: при значении концентрации ПКТ равном и выше 0,45 нг/мл прогнозировали инфертильность эякулята, то есть возможный неблагоприятный исход ВРТ, при значении концентрации ПКТ менее 0,45 нг/мл эякулят рассматривают как фертильный, прогнозируя благоприятный исход ВРТ.

Истинно положительным (ИП) результатом считался исход ВРТ - наступившая беременность у партнерши после проведенного лечения, при этом перед ЭКО у партнера уровень ПКТ в эякуляте был ниже 0,45 нг/мл. Истинно отрицательным (ИО) результатом считался исход ВРТ, когда беременность у партнерши не наступила, но концентрация ПКТ в эякуляте партнера также была равна или выше указанного значения [19].

Ложно положительный (ЛП) результат был в случае, когда беременность у партнерши не наступила после ЭКО, но перед лечением регистрировался уровень ПКТ в эякуляте ниже 0,45 нг/мл. Ложно отрицательным (ЛО) результатом считался в случае, когда после применения ВРТ беременность у партнерши наступила, но содержание ПКТ в сперме было равно или выше 0,45 нг/мл.

Диагностическая чувствительность (ДЧ) была представлена как отношение количества мужчин, концентрация ПКТ в эякуляте у которых была меньше 0,45 нг/мл и после прохождения лечения бесплодия в паре была зарегистрирована беременность у партнерши, к общему числу мужчин, у партнерш которых наступила беременность после лечения - ДЧ=ИП/(ИП+ЛО) [19]. Диагностическую специфичность (ДС) тестов рассчитывали как отношение количества мужчин, концентрация ПКТ в эякуляте у которых была равна 0,45 нг/мл или выше, и после ЭКО факт беременности у партнерши в паре не был зарегистрирован к общему числу мужчин, у партнерш которых не наступила беременность после лечения - ДС=ИО/(ИО+ЛП). Диагностическую эффективность (ДЭ) теста определяли как отношение правдоподобия положительного и отрицательного результатов, рассчитывали как отношение количества мужчин, содержание ПКТ в эякуляте которых было меньше 0,45 нг/мл больных, к общему количеству мужчин, включенных в исследование - ДЭ=ИО+ИП/(ИО+ИП+ЛП+ЛО) [19].

Результаты и обсуждение

Среднее содержание ПКТ в СП составило 0,321±0,237 нг/мл, медиана и интерквартильный диапазон 0,274 (0,155-0,396) нг/мл, и варьировало от 0,006 до 1,193 нг/мл (табл. 2).

Рис. 1. Концентрация ПКТ в семенной плазме эякулята обследованных: 1 - основная группа; 2 - группа сравнения

Установлены статистически значимые различия при сравнении результатов концентрации ПКТ семенной плазмы между группами (критерий Манна - Уитни U=856,0000; p=0,001479) (рисунок, табл. 2). Содержание ПКТ в СП не коррелировало с объемом эякулята (коэффициент ранговой корреляции Спирмена R=-0,014587), ни с показателями фертильности - с концентрацией сперматозоидов (R=0,051361) и их количеством в эякуляте (R=0,013648).

После проведения ЭКО супружеским парам, у мужчин основной группы (n=56) количество ИП результатов было наибольшим и составило 33 случая, остальные результаты - ЛП-4, ИО-13, ЛО-6. ДЧ составила 84,62 %, ДС 76,47 %, ДЭ 82,14 %.

По нашему предположению, высказанному ранее [14], ПКТ вырабатывается в каком-то из органов мужской репродуктивной системы (яички и их придатки, предстательная железа, семенные пузырьки), и в составе секрета попадает в эякулят. Статистически значимые различия концентрации ПКТ между основной группой и группой сравнения свидетельствует о том, что повышенный уровень ПКТ в СПл может являться неблагоприятным фактором, связанным с пониженной фертильностью спермы.

Убедительно высокие показатели ДЧ (84,62 %), ДС (76,47 %) и ДЭ (82,14 %) тестов, характеризующих исходы ЭКО, по нашему мнению, позволяют использовать показатель концентрации ПКТ в СПл для косвенной оценки качества сперматозоидов в эякуляте (патент № 2797507) [20]. Данный критерий может лечь в основу прогнозирования мужского бесплодия на доклинических стадиях, что позволит выделить пациентов с повышенной концентрацией ПКТ в эякуляте в отдельную группу, провести им адекватный диагностический поиск и своевременную терапию.

Внедрение в практику указанного критерия определения качества сперматозоидов может улучшить результат лечения бесплодия в супружеской паре с применением ВРТ. Известно, что использование эякулята партнера с более высокими показателями сперматогенеза повышает вероятность зачатия при ЭКО. Так, применение при данной процедуре спермы с достаточно низким содержанием ПКТ в СПл, по нашему предположению, позволит увеличить процент наступления беременности у партнерши; а выявление высокого показателя концентрации ПКТ в СПл у мужчины определит дальнейшую тактику терапии бесплодия в супружеской паре: партнеру будет необходимо пройти дополнительное обследование, а возможно и курс лечения, и только после этого участвовать в процедуре ЭКО [7, 20]. За счет улучшения точности прогнозирования на ранних стадиях исходов ЭКО повышается также и экономическая эффективность данного метода ВРТ.

Выводы

1. Прокальцитонин семенной плазмы может выступать в роли маркера нарушений сперматогенеза.

2. Исследование прокальцитонина в эякуляте повышает достоверность выявления мужского фактора бесплодия на доклинических стадиях, обеспечивает точность прогнозирования исходов ЭКО.

3. При реализации программ ВРТ важно использовать эякулят преимущественно с более низкой концентрацией прокальцитонина в семенной плазме  

Список источников

1. 1. Влияние оппортунистических инфекций на эффективность экстракорпорального оплодотворения у женщин с различным типом бесплодия / Е.А. Кончакова, М.Г. Авдеева, А.А. Кончакова, Х.Я. Добриев // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2022. - Т. 25, № 1. - С. 18-25.
2. 2. Способ прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ / Т.Л. Боташева, Ю.А. Тян, В.А. Линде [и др.] // Патент России № 2581027, 2016. Бюл. № 10.
3. 3. Эффективность переносов эмбрионов у пациенток в криопротоколах экстракорпорального оплодотворения / Ю.Н. Башанкаева, Н.В. Зароченцева, К.В. Краснопольская, К.М. Исакова // Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. - 2016. - Т. 10, № 2. - С. 23-30.
4. 4. Эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий в зависимости от характера изменений спермограммы / С.И. Гамидов, Р.И. Овчинников, А.Ю. Попова [и др.] // Андрология и генитальная хирургия. - 2018. - Т. 19, № 2. - С. 82-87.
5. 5. Impact of Various Parameters as Predictors of The Success Rate of In Vitro Fertilization / Dabbagh Rezaeiyeh R., Mehrara A., Mohammad Ali Pour A. [et al.] // J Urol. - 2022. - Vol. 16, № 2. - Р. 76-84.
6. 6. Reproductive function in men conceived with in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection / Catford S.R., Halliday J., Lewis S. [et al.] // Am J Transplant. - 2022. - Vol. 117, № 4. - Р. 727-37.
7. 7. Корнеев И.А. Мужское бесплодие при оксидативном стрессе: пути решения проблемы // Урология. - 2022. - № 1. - С. 102-108.
8. 8. Корнеев И.А. Сравнительная характеристика параметров эякулята мужчин, обратившихся в центр репродуктивной медицины с 2016 по 2022 г. // Урологические ведомости. - 2023. - Т. 13, № 1. - C. 23-29.
9. 9. Clemens J.Q. Infection and Inflammation of the Genitourinary Tract // J Urol. - 2023. - Vol. 209, № 2. - Р. 428-429.
10. 10. Role of Infection and Leukocytes in Male Infertility / Das S., Roychoudhury S., Roychoudhury S. [et al.] // Adv Exp Med Biol. - 2022. - Vol. 1358. - Р. 76-84.
11. 11. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen, sixth edition. Geneva: World Health Organization; 2021.
12. 12. Диагностический цитокиновый маркер бесплодия мужчин - интерлейкин 4 / О.В. Бухарин, М.Д. Кузьмин, Н.Б. Перунова [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2022. - Т. 67, № 3. - С. 151-157.
13. 13. Евдокимов В.В., Исаев Н.К., Туровецкий В.Б. Влияние факторов различной природы на фертильность эякулята in vitro // Андрология и генитальная хирургия. - 2022. - Т. 23, № 1. - С. 45-52.
14. 14. Концентрация прокальцитонина в эякуляте и сыворотке крови здоровых мужчин и мужчин с олигозооастеноспермией / Д.Ю. Соснин, Н.А. Зубарева, О.Ю. Ненашева [и др.] // Урология. - 2017. - № 1. - C. 61-65.
15. 15. Овчинников Р.И. Мужское бесплодие, связанное с окислительным стрессом сперматозоидов: патогенез и терапевтический подход // Медицинский совет. - 2022. - Т. 16, № 5. - C. 46-53.
16. 16. Прогностические возможности протеомного анализа семенной плазмы у мужчин с азооспермией / А.Г. Бржозовский, Н.Л. Стародубцева, А.Е. Бугрова [и др.] // Андрология и генитальная хирургия. - 2021. - Т. 22, № 3. - С. 18-24.
17. 17. Роль мужского фактора в реализации повторных ранних репродуктивных потерь / Е.И. Лебедева, С.Д. Яворская, А.И. Неймарк [и др.] // Проблемы репродукции. - 2022. - Т. 28, № 3. - C. 96-104.
18. 18. How to use biomarkers of infection or sepsis at the bedside: guide to clinicians / P. Póvoa, L. Coelho, F. Dal-Pizzol [et al.] // Intensive Care Med. - 2023. - Vol. 49, № 2. - Р. 142-153.
19. 19. Мошкин А.В. Чувствительность и специфичность как клинические индикаторы качества лабораторных исследований // Лабораторная служба. - 2020. - Т. 9, № 4. - C. 5-6.
20. 20. Соснин Д.Ю., Галькович К.Р. Способ прогнозирования исходов ВРТ // Патент России № 2797507. - 2023. - Бюл. № 16.